时间：2023-03-22 17:36:52
绪论：在寻找写作灵感吗？爱发表网为您精选了8篇细胞增殖论文，愿这些内容能够启迪您的思维，激发您的创作热情，欢迎您的阅读与分享！
患儿11例，平均年龄2-4岁，11例患儿的临床表现依次为:淋巴结肿大(76%，19/25)，肝脾肿大(72%，18/25)，皮疹(60%，15/25)，骨质浸润(52%，13/25)，贫血(52%，13/25)，发热(52%，13/25)，肺部浸润(44%，11/25)。实验室检查血象、骨髓像、肺部x线缺乏特异性表现;骨骼X线病变以溶骨性骨质破坏多见;头颅CT/MRI为诊断颅底骨质破坏和蝶鞍病变的重要方法。患儿确诊为朗细胞组织细胞增生症。
治疗
本病属于免疫系统疾病，治疗该病症必须增强免疫力，可以注射"免疫抑制剂"治疗。
2护理
护理计划及早制定。患儿所患一种罕见的疾病，尽快确诊，积极配合医生迅速和有效地使所有援助检查，皮肤科，儿科和其他科室会诊。对这种严重的疾病评估，获取相关信息，并与医生的治疗方案，孩子们组织讨论，制定了详细的护理计划，认真落实和不断改进的条件，并根据合理的谨慎措施转变。
2.1发烧护理 密切观察体温变化，每天6次测量体温恢复正常后3天，每天一次衡量，卧床休息，补充营养和液体的温度后，及时更换汗湿衣服，以防止滴湿疹的发生。
2.2心理护理 儿童有康复的强烈愿望，通过耐心说服，消除恐惧的治疗，治疗可以有意识地给予精神上安慰。为家长密切合作进行治疗。
2.3 高蛋白饮食和营养，高维生素，好食物和合理的原则，以改善机体健康。增加人体的耐受化疗，提高免疫力。特殊治疗时，如呕吐，严重且难以考虑饮食或静脉高营养消耗的元素，以确保病人有足够的热量，改善营养状况。
2.4病人的病情在手术前仔细观察，观察腹部疼痛，位置，范围，腹胀情况排气排便情况的性质，使快速，皮肤准备，术前皮肤测试等，禁用止痛药，以防掩盖病情。
2.5 患者手术后回到病房，以枕平卧4〜6小时，头侧面，保持呼吸通畅，必要时给予吸氧。麻醉前作出明确，监测有无呕吐，腹胀，排气排便情况，保持引流通畅胃肠减压生命体征及腹部症状密切观察，并观察引流液，颜色和数量的性质;禁止在食品，良好的口腔护理，根据医生的意见合理补充水分和电解质溶液;术后早期的半卧位，鼓励早期活动，防止肠粘连，这将有利于身体恢复;蠕动恢复。适当的饮食应少量多餐，逐渐结束，并观察是否进食后腹痛，腹胀，呕吐等症状，如果上述症状，应暂停进食，看看是否有肠梗阻，吻合口狭窄等并发症;该观察伤口无出血，渗液，肿胀，保持伤口敷料清洁干燥，防止尿液污染伤口。
2.6药物不良反应及护理 对化疗药物的胃肠道不良反应的各种观测是普遍的。在化疗前或口服止吐药物化疗期间的饮食，以减少恶心和呕吐，静脉注射30分钟要轻和消化。做三查七对的。（1）长春新碱导致末梢神经炎，皮肤，肌肉和关节四肢麻木，疼痛，腹痛，肝，肾功能表现应该是保护，注意血液中的变化，低白血细胞分离应该很好对各种感染的保护;（2）高剂量甲氨蝶呤结合6 - MP的时间。使胃肠道反应，口腔炎，口腔溃疡恶化。重要的骨髓抑制，国会议员在6个半小时，晚饭后口服，每日一次，以减轻反应，同时加强口腔护理，甲氨蝶呤输液，可能含有冰或冷水，以减少口腔黏膜和菜，氨浓度的甲氨蝶呤（3）VP16的使用，应密切观察有无泄漏，一旦发现，应立即停止输液，以避免组织坏死和（或）血酸静脉炎。 16输液的副总裁会引起性低血压，它会促使孩子说谎，缓慢的速度静脉滴注。
密切观察病情变化，为争取更多的抢救时间。密切观察生命体征。启用多功能心电监护仪密切监测呼吸，心率，血氧变化，所以在氧气下降，及时救护。关闭的体温，体温过高，及时物理降温，低温，温暖的加强，观察使温度维持在正常范围内，四肢温暖。遵守一般条件。皮肤儿童，所有的重要器官损伤，严重的疾病，快速，并密切观察皮肤出血，疱疹比以前或加重更好;肝脏是放大或缩小趋势;观察的脸部，嘴唇，身体肤色，反应和尿色;观察胃肠道出血：留置胃管，观察出血，患儿棕色胃胃内容物后退出了0.6个百分点后，苏打水洗胃凝血酶鼻饲的效果，但病情反复。由于消化道出血，偶尔空腹的患儿，有低血糖的风险，血糖监测跟踪，使低血糖的及时修正。血液生化检验显示低血清钙，补钙时间，以防止钙抽搐。皮肤，粘膜的护理。与身体皮肤，头发，手，有出血，紫癜盖脚，儿童大量散在疱疹，疱疹损坏个人，每天1:15000高锰酸钾溶液擦洗，动作轻柔，穿着柔软的衣服，以免加重皮肤病变，破损的皮肤涂上百多邦。口腔用无菌生理盐水进行常规口腔护理，以减少感染。患儿躁动时易擦伤足跟部，用无菌纱布加以包扎。加强臀部护理，大小便后及时更换吸湿性好、柔软的尿裤，保持全身皮肤清洁干燥。适时翻身，以免局部长期受压。
经过全面、细致的一轮复习后，学生已基本掌握了教材知识，作为二轮复习的重点则应切实加强对新课程标准和2012年考试说明的研究，以此制定复习目标，这样复习才有针对性和实效性。如：2012年考试说明中对细胞增殖内容的要求。
从近几年的高考来看，命题重点围绕细胞周期中染色体行为和数目变化规律，减数分裂与有丝分裂的比较及图像识别，减数分裂的过程及与遗传的关系。那么学生在这块内容中到底还有哪些未落实到位？又该如何帮助学生有效解决这些问题？
一、典型错误分析
【典例】图为雄果蝇体内某细胞分裂过程中，每条染色体上DNA含量变化(甲曲线)和染色体数目变化(乙曲线)。请据图回答：
(1) CD段细胞中有( )条染色体，DE段有染色单体( )条，FG段细胞中有DNA( )个，DE段可形成四分体( )个。
(2)在A点若用3H标记该细胞的DNA双链，再将其转入不含3H的培养基中
培养，在FG段一个细胞中的染色体总数和被3H标记的染色体数分别为( ) ( )。
(3)若该细胞基因型为AaXbY，在分裂完成后产生了一个AYY的，则另三个的基因型分别为( )( )( )。
(4)该细胞某一条染色体的两条单体相同位点出现不同基因的变化可发生在( )段。
该题考查目标：有丝分裂与减数分裂的曲线辨析，减数分裂中染色体、DNA、单体的数目变化规律，染色体、DNA、脱氧核苷酸链之间的关系，及减数分裂与生物变异的联系。通过学案反映出学生存在以下几方面的问题：
1.基础知识不扎实，记忆不牢，知识点混淆。例如：在第(1)小题中学生由于把果蝇染色体数4对记成了4条从而造成CD段错写为含4条染色体。由于不明确四分体的概
(3)纠错补偏，反思内化。有一句教育的真理“世界上最有价值的习题不是专家出的习题，而是自己做错的习题”。二轮复习抓错题相当机的导航灯一样，它可以帮我们指明前进的方向。学生在一轮复习中已做了大量试题，经历了多次模拟考试，难免出现许多错误，若能指导学生将这些错误进行分类整理，就会发现反复出错的地方就是自己知识上的薄弱环节，这时就可针对性地翻阅书本，结合书本来解决知识漏洞，当然有些错误可能是学生不注意使用生物科学术语回答，画图表、写实验设计不规范严谨等造成的，通过纠错也可有效提醒学生对自己这方面问题的关注。
二轮复习不做题不行，但沉迷于题海也不行，关键要提高做题质量。总结归纳常见题型的解题规律、方法技巧，从而达到弄懂一道题，旁通一类题的目的。也可通过演练近几年的高考真题亲身感触高考题的命题思路、设问方式，从中感悟解题技巧。
3.消除情感梦魇，增强自信。 美国著名心理学家Robert Rosenthal曾做过这样一个实验：他从某个班级的花名册中随意挑选了几个名字，并且告诉老师这些学生经过测试智商较高。之后，老师便关注并鼓励他们，这些学生也由于有了自信而努力学习。八个月之后，那些“高智商”的学生的成绩竟有了惊人的进步。这个实验证实了自信的重要性。那么如何增强学生对考试的自信，以实现从容应考呢？
(1)充分的考前准备：多数学生都有这样的体会：“一看到考题不难，紧张不安的情绪便会随之减少，脑子不再麻木，思维也变得灵活了。”因此，考前一定要做好知识与技能双重准备，并针对考试中可能出现的复杂情况，进行有目的的训练，做到胸有成竹，考试当然也充满信心。
(2)适当的心理调节：既要正确对待压力，但也不能给自己增加压力。不过多去想考试成败将会给自己带来什么后果，尤其不夸大考试成败的影响，树立“天生我材必有用”的广阔意境。
【摘要】文章对生产制造企业价值链及价值链分析理论进行总结,指出价值链分析在制造企业内部物流成本管理中的运用有极强的优越性。
【关键词】价值链分析;制造企业;内部物流成本管理;运用
物流成本作为企业“第三利润源泉”,倍受各方的关注。物流成本管理的意义在于:通过对物流成本的有效把握,利用物流要素之间效益背反关系,科学、合理地组织物流活动,加强对物流活动过程中费用支出的有效控制,降低物流活动中的物化劳动和活劳动的消耗,从而达到降低物流总成本,提高企业和社会经济效益的目的。
目前,造成中国物流成本居高不下的关键因素是制造业,困扰商品流程优化的还是制造业。为了提高制造业的竞争力,要求从业人员能够对原材料、半成品、产成品以及相关的信息流动做到7R,即正确的产品、正确的质量、正确的条件、正确的顾客、正确的地方、正确的时间、正确的成本。这也正是现代物流管理的实质。制造企业的物流成本管理中引入价值链理论,能对企业内部物流作业流程进行持续改善,以消除不必要的作业;通过对物流成本进行评价,分析确立物流成本控制环节,有利于帮助企业降低物流作业成本。
一、价值链及价值链分析方法
信息技术的广泛应用,使企业从价格竞争、产品竞争和个体竞争转向价值竞争、服务竞争和网络竞争,而持续的核心竞争优势对于企业后一种情况的竞争具有更加重要的战略意义。价值链作为确定企业核心竞争优势的一种基本工具应运而生。它是一种系统性研究企业竞争优势的方法,其核心内容是分解企业价值链、确定价值活动成本,以价值最大化为目标重构价值链,建立其优化结构,从而提升企业的核心竞争优势。价值链的优化研究经历了从迈克尔·波特的传统价值链、Peter·Hines的“集成物料价值的运输线”、JefferyF1Rayport和JohnJ1Sviokla的虚拟价值链,再到价值网理论的一个长期过程。
价值链已经发展成为当代网络经济环境下的一种组织战略思想和模式,它是以企业储运、生产、销售、服务等业务流程为载体,以实现顾客价值最大化为直接目标而形成的企业内部价值活动的系统性结构,为企业形成信心竞争优势、创造长期利润提供了一种系统的、动态的分析方法。
(一)生产制造企业的价值链
现代企业管理思想认为企业是一个为最终满足顾客需要而设计的一系列作业的集合体,企业本身就是一个由此及彼、由内到外的作业链,每完成一项作业要消耗一定的资源,而作业的产生又形成一定的价值,转移到下一个作业,依此转移,直至形成最终产品,提供给企业外部顾客。而最终产品作为企业内部作业链的最后一环,凝结了各个作业链所形成并最终提供给顾客的价值。因此,作业链同时又表现为价值链,作业耗费与作业产出配比的结果,就是企业的盈利。价值链由多个作业组成,价值链内信息的传递基本上具有双向特征。根据价值链各个环节的特征,价值链可分为外部价值链和内部价值链。外部价值链包括企业、供应商、客户等;内部价值链主要包括生产活动的作业活动等。
(二)内部价值链分析
低成本是企业取得任何竞争优势的有利保障。企业应在营造企业核心竞争力的前提下,对内部价值链进行分析,主要是为了解决降低企业内部成本问题。而这些分析工作都是以“作业”为中心,在整个过程中还须结合事前管理的统筹规划、事中管理的实时控制和事后管理的分析考评,以确认企业的价值活动有哪些,处于什么样的分布状态,并将每个价值活动所耗费的成本与对产品价值的贡献相比较,根据企业各个作业活动在价值增值中的不同作用,将其进行细分并采取措施加以改进。
内部价值链分析是将从基本的原材料到企业最终用户之间的价值链分解成作业活动,以便理解成本的性质和差异产生的原因,通过差别分析和成本分析,找出企业在价值生产过程中的利弊。企业为了实现其“股东价值最大化”的经营目标,必须提高其作业产出,减少作业耗费,但并非所有的作业都能够创造价值,这就需要溯本求源,分析哪些作业能够增加价值,哪些作业不能增加价值,并尽可能消除不能创造价值的作业,即使能创造价值的作业,也应尽可能减少其作业耗费,这一切都要借助于作业分析。为此,作业管理(Activity-basedManagement简称ABM)作为一种现代企业管理方法由此产生,作业分析主要过程如下:
1.确定作业。确定企业的价值生产过程,根据作业对竞争优势的贡献大小区分作业,从而确定产品或服务的总成本构成。
2.评估作业。识别各过程的中间环节,从而确定获得相关成本优势的机遇。每项物流作业之间不是完全独立的,在同一条价值链上是相互依赖的。例如,企业产品制造的实现必须依赖于原材料的储备以及运输,而这种相互之间的依赖性有时也会造成一些不必要的重复操作,从而影响整体的效率以及效益。因此,通过价值链分析法辨别出冗余环节,按各个作业活动在价值增值中的作用不同,将其细分为直接增值作业活动、辅助增值作业活动、非增值作业活动和逆增值作业活动,从而确定价值创造过程中的核心环节。
3.优化作业。通过对作业活动的评估,拟定改进方案。对于直接增值作业活动,应在保持其增值效果不降低的前提下,尽可能提高运行效率,减少资源耗费和占用;对于辅助增值作业活动,有必要在维持其辅助作用不变的情况下,尽可能减少资源占用;对于非增值作业活动和逆增值作业活动,则应尽可能减少和避免,达到优化作业的目的。
同时,管理深入到作业水平,进行作业分析,就要求变革传统的成本计算,使其与之相适应,即要求成本计算深入到每一作业,进行作业成本计算。由此,基于企业价值链的作业成本法应运而生。
二、价值链分析在制造企业内部物流成本管理中的运用
对于生产制造型企业来讲,生产制造赋予了最终商品的大部分价值,是企业的核心业务单元。另外,现代的制造型企业在不断加大生产力度的同时也十分注重客户的售后服务,不断加大其在产品价值增值过程中的作用,从而逐渐地形成企业的核心竞争力。
企业的物流过程从价值链角度分析,不但有利于节省自身的业务运作时间、合理利用资源,而且有利于为最终的顾客提供最有价值的服务,在企业的物流链上找到价值增值过程中贡献最大的核心环节。同时,利用价值链分析法企业的物流活动也不再简单地以全面削减成本为目的,而是在各价值生产过程中降低成本、提高效率。
制造业企业内部物流主要包括:供应物流,即上游企业对本企业所需物资供应的物流活动;原材料、零配件部件物流,即企业内部所需要原材料、零配件部件从供应仓库或者上游企业直接供应到生产线的物流活动;半成品物流,即生产过程中的半成品从上一道工序(或车间)到下一道工序(或车间)的物流活动;产成品物流,即生产出的成品或最终产品,从生产线到产成品仓库或者直接到下游企业的物流活动;回收物流,即生产过程中的废弃物丢弃或再生所发生的物流活动。
内部物流的合理化可以促进生产过程中资源配置的合理化和工艺流程的合理化,从而大大提高制造业企业的竞争力。目前,许多企业已经开始意识到内部物流管理对于降低成本、提高物流效益,改善企业管理的重要作用,纷纷优化企业内部物流管理,建立内部物流部门,对订单、库存、运输、仓储、加工等物流各环节或全过程实施高效的管理计划和控制,促进企业可持续发展,增强企业核心竞争力。
但现有企业内部的物流管理存在着许多软肋与制约:
一是传统的管理理念、机制、方式等影响企业内部物流效率的提高。转二是企业内部物流环节纵、横向联合薄弱。
三是物流成本核算缺乏财务标准,责任主体不清,物流管理效益难以凸现。
四是对现代物流的研究较滞后,缺乏专业人才,实际操作经验少等。
三、基于价值链分析方法的优越性
基于价值链分析的成本观是成本管理从价值保证和价值增加两个视角来进行的。由此,价值链成本管理实际上也就具有了双重的性质:一是控制资源的必要而足够的投入,从而保证顾客价值(表现为保证提供合格产品);二是控制资源的耗费,以提供尽可能多的顾客价值(表现在保证质量前提下的较低价格)。
通过价值链分析,对外能识别并确保企业在行业或产业中的优势地位和核心地位,从而能够在整体价值链顾客价值最大化的前提下,通过价值让渡等方式结成战略联盟而形成优势价值链联盟,以使企业确保自身的优势战略定位;对内运用价值链分析法来考察企业各项活动及其相互关系,能够尽可能消除不增加价值的作业,降低可增加价值作业的资源消耗,能更全面地分析企业成本的构成,从而避免使用传统成本管理方法的缺陷。
因此,基于价值链的成本管理具有以下优势:
(一)充分考虑了降低成本的相对性问题
成本的降低有绝对成本降低和相对成本降低之分。绝对成本降低是通过一定的途径使成本的发生额低于一定的水平(标准或预算);相对成本降低是将成本与作业的质量、效率以至最终与企业效益联系起来,它并不单纯追求成本绝对额的降低,而是追求成本效益的不断提高。
(二)抓住了成本管理的关键即作业问题
基于价值链的成本管理从研究导致成本发生的作业及作业结构开始,通过对作业及作业结构的优化、改造来达到提高成本效益的目的,因而这种成本管理抓住了成本问题的关键。
(三)扩大了传统成本管理的控制范围
基于价值链的成本管理在研究成本问题时不仅要考察生产作业,还要考察非生产作业;不仅考察基本作业,还要考察辅助作业;不仅要考察本企业的价值链,而且要考察竞争对手、供应商、销售渠道、顾客甚至整个行业的价值链,以寻求广泛提高本企业成本效益的途径。
(四)更为全面地考虑了成本管理中的相关问题
基于价值链的成本管理追求的是整个价值链效益的优化,这就要求成本管理须正确处理作业与作业之间,业务流程与业务流程之间,本企业价值链与供应商、销售渠道之间的关系;要求通过优化这些关系来提高整个价值链的效益,而不能为获得局部利益损害整体利益,也不能为了短期利益而损害长期利益。
【参考文献】
[1]张令荣,杨梅.基于价值链的企业物流一体化成本分析方法研究[J].大连理工大学学报(社会科学版),2005(26):4.
[2]吴普松.价值链下的作业成本法:理论分析与中国实际[J].集团经济研究,2006(3).
动脉硬化性闭塞症（ASO）是由于全身动脉粥样硬化，形成动脉管腔狭窄，甚至继发性血栓形成，发生阻塞，引起患肢慢性或急性的缺血症状，甚者发生坏疽，重者可危及生命。近年来，随着我国人民生活水平的不断提高，饮食结构的不合理以及人口的老龄化，ASO的发病呈明显上升趋势[1]，此病属于中医“脱疽和脉痹”范畴，祖国医学认为本病多因饮食失节，膏粱厚味，损伤脾胃，湿浊内生，痰瘀互结，阻塞经脉；或因气血亏虚，运行无力，脉络瘀阻，气虚血瘀，经脉痹阻，气血不达四末而发为脉痹；或因肝肾亏虚，气竭精伤，肾水消灼，筋炼骨枯，终成脱疽之症[2]。
1治疗现况
中医对本病的病机尚未有一个统一的标准，临床治疗多辨证使用益气活血，养阴清热，健脾祛湿，温经通络，补益肝肾，温阳散寒，活血化瘀，或配合中药外洗外敷等方法，多数医家认为瘀血内阻是本病的基本因素。因此，活血化瘀应贯穿疾病始终，临床上也多以活血化瘀方剂为主，疗效确定。西医治疗方法主要有药物治疗、手术治疗、介入治疗。药物治疗包括抗栓和扩张血管治疗，积极的治疗高血压、高血脂，防治动脉硬化，稳定斑块，防止斑块破裂。手术治疗主要指重建肢体血运，包括动脉内膜剥脱术、血管旁路移植术和血管腔内治疗术；ASO的介入治疗仍局限于短段病变，短段主髂动脉病变的球囊扩张和支架置入术效果较好；此外，随着狭窄的逐渐形成，肢体的侧支循环随之逐渐建立[3]，使得一些医家逐渐注意到利用血管内皮细胞生长因子等诱导血管生成的基因治疗。
2补肾与动脉硬化性闭塞症关系
动脉硬化性闭塞症多见于中老年患者，人到中年以后，肾中精气逐渐减少，出现肾虚。肾阴虚则脏腑百脉、形体器官失充，血液凝涩，脉络失养，则患者表现为肢端色黑坏死破溃，剧痛，夜不能眠，肢端潮红或暗红，肢体肌肉明显萎缩，皮肤干皱、口渴、便秘、溲赤，发热；肾阳虚则阳气亏虚无力推动、温煦气血以荣四末，致血行迟缓不畅而瘀，则指（趾）端坏疽或溃疡、四肢发凉，患处皮肤温度较低，肤色苍白，脉搏减弱或消失等。笔者认为肾虚是造成本病血脉闭塞的关键环节，在治疗本病中补肾也起着关键的作用，鹿茸性甘、咸、温，归肝、肾经，具有补肾阳、益精血、强筋骨、调冲任、托疮毒之功效，鹿茸对动脉硬化闭塞症的防治作用主要有以下几点。
2.1鹿茸可促进血液生成和血行中医认为，鹿茸可使人体肾精充盛，防止衰老，壮肾阳，肾阳可促进机体的温煦、运动兴奋和化气功能，使气的运动加快，则血的输布运行也加快，气化加快则产热增加，使温煦作用加强，使阳虚患者患肢血脉得到温养而减轻病情。鹿茸还可益精血，强筋骨，为血肉有情之品，使动脉硬化性闭塞症患者患肢血液充足，血脉得到濡养，有助血行。李召[4]研究发现鹿茸对正常及白血病骨髓与人骨髓单个核细胞有促增殖作用，能促进骨髓造血，而且鹿茸有抑制红细胞凝集和促进纤维蛋白溶解的作用[5]。
2.2鹿茸可促进血管新生鹿茸在治疗动脉硬化性闭塞证中还和促进血管新生有关，研究发现温阳药物鹿茸能促进人骨髓间质干细胞的增殖活性，而骨髓是一个天然的细胞生长因子库，在其生长过程中，成骨细胞、神经细胞、成纤维细胞及上皮细胞的生长同步进行[6]，血管内皮细胞的祖细胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）主要存在于骨髓。何秀娟等[7]发现鹿茸能促进离体人脐静脉内皮细胞的增殖，提示在体内可能促进EPCs的增殖，促进血管生成。血管内皮祖细胞是成年个体中与血管新生关系最为紧密的干细胞成分，是血管内皮细胞的前体细胞，EPCs的增殖、趋化、分化，参与新生血管的形成，它可以被细胞因子或者来自于外周血中的血管生长因子信号动员到外周循环而进入外周血管组织中，通过整合到血管壁或提供生长因子两种方式来促使新生血管的形成[8]，新生的血管为缺血部位提供氧、营养物质和生物活性物质，进一步促进缺血部位血管新生，改善缺血状态。中医认为肾主骨生髓，骨者，髓之府，因此，补肾可生髓，从这点也提示了鹿茸可以促进骨髓增殖。血液中的内皮祖细胞对组织缺血有反应，人外周血中培养扩增的EPCs，在肢体缺血的动物体内，能够特异性地向缺血部位趋化，参与血管生成，增加毛细血管数量，具有改善组织血流的治疗作用。向缺血部位趋化的具体机制还不清楚，可能与缺血所造成的局部低氧血症、缺血组织释放的某些细胞因子和炎性因子，对这些细胞的趋化可能发挥了一定作用[9]。
2.3鹿茸可促进疮口愈合中医认为鹿茸有托疮毒之效，可用于疮疡久溃不敛，或阴疽内陷不起，可温补精血，托毒外出和生肌之效，对于动脉硬化闭塞症后期出现的破溃反复难愈有托毒和生肌之功，可促进疮口愈合。现代医学发现，马鹿茸多肽通过促进表皮细胞和成纤维细胞增殖加速皮肤创伤愈合[10]。
3小结
鹿茸性甘、咸、温，归肝、肾经，具有补肾阳、益精血、强筋骨之功效，可用于肾阳不足、精血亏虚、筋骨无力之症，为补肾之良药。这从传统理论方面提示了鹿茸具有促造血，缓解肢体不适之功效，笔者在临床中也遇到此病患者甚多，常给予芪芍复脉汤[鹿茸2g（研末冲服），黄芪30g，白芍18g，桂枝10g，当归15g，麦冬15g，玄参15g，川芎10g，全蝎10g，川牛膝15g，土元10g，乌药10g，丹参30g，三七粉3g，阿胶6g，甘草6g]，随症辨证加减，意在用芪芍复脉汤益气活血，滋阴复脉，加鹿茸意在温补肾阳，又补益精血，强筋骨，恢复阳气温煦推动之力，使精血充盛，临床应用，效果显著，而且许多患者在病情好转的同时病变部位血管彩超发现新生血管且血流通畅。
现代研究认为鹿茸多肽既对表皮细胞和成纤维细胞具有显著的促进增殖作用，加速创面愈合的质量和速度，又可促进血液运行，促进血管内皮细胞的增殖分化和迁移，促进病变部位血管生成，这些都表明鹿茸对动脉硬化性闭塞症的防治有着积极的作用，加之中医认为鹿茸乃血肉有情之品，可以补肾填精，由以上可以推断，鹿茸骨髓EPCs促进血管新生，鹿茸是否还具有把EPCs动员到外周缺血组织的作用，是否需要益气活血类药物来促进它的转移，这些还有待进一步的实验及临床观察，但这一发现对缺血性疾病的治疗提供了一个新思路。董蔚等[9]在体外扩增EPCs的基础上，进一步观察了EPCs在动物体内促血管生成的作用，EPCs可特异性地分布在缺血肢体的血管结构中，缺血部位的侧支循环形成和毛细血管新生可能与外源性血管生长因子、基因或内皮祖细胞转入组织中有关，我们可以发现和利用一些药物或生长因子促进EPCs表达、促进EPCs从骨髓向外周动员，提高循环中的血管内皮祖细胞的数量，或通过移植体外扩增的EPCs来增强缺血组织的血管再生，从而促进新生血管的形成。鹿茸在治疗动脉硬化性闭塞症中起着重要的作用，随着对其作用机制的深入研究，很有可能寻找到治疗ASO的有效途径。
参考文献：
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[8]武丽萍，马华.血管内皮祖细胞与血管新生[J].中西医结合心脑血管病杂志，2008，6（8）：946948.
【关键词】 雷帕霉素； 肝移植； 冷保存； 再灌注； 胆管上皮细胞； 增殖
【Key words】 Rapamycin; Liver transplantation; Cold preservation; Reperfusion; Biliary epithelial cells; Proliferation
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
兔抗增殖细胞核抗原多克隆抗体、鼠抗pSTAT3tyr705单克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司；ChemMateTM Envision免疫组化试剂盒为丹麦Dako公司产品；RPM为美国惠氏百宫制药公司惠赠。
1.3 各组术后生存分析
1.4 肝功能指标检测
1.5 兔抗增殖细胞核抗原、α平滑肌肌动蛋白免疫组织化学检测
肝组织常规固定、包埋、切片。采用兔抗增殖细胞核抗原作为细胞增殖期G1S期的评价指标，α平滑肌肌动蛋白作为肌纤维母细胞标志。按ChemMateTM Envision免疫组化试剂盒说明书操作。显微镜下观察α平滑肌肌动蛋白表达阳性细胞的胞质呈棕色，增殖细胞的胞核呈棕色。计算7个高倍镜(×400)视野内，每100个胆管细胞中增殖的胆管上皮细胞所占比例的均值作为该样本的胆管上皮细胞增殖率［4］。
1.6 统计学分析
计量资料以±s表示，所有数据应用SPSS 10.0软件进行统计分析，多组均数间的比较采用单因素方差分析，采用KaplanMeier法绘制生存曲线，Logrank法检验各组生存率之间的差异。
2 结果
2.1 各组术后生存分析
冷保存12 h组生存率明显低于冷保存1 h组(P=0.017 4)，而与雷帕霉素组水平接近(P=0.89，图1)。两组大鼠死亡的主要原因为移植肝肝功能不全，表现为肝脏淤血或伴有局灶性坏死，腹水、黄疸，肝功能酶谱升高，部分死亡大鼠胆管内可见褐色胆泥形成。
图1 各组肝移植术后生存曲线
2.2 各组肝功能检测
2.3 各组胆管上皮细胞增殖
2.4 胆管周围肌纤维母细胞分布
图2 肝移植术后胆管上皮细胞增殖(红色箭头所示为增殖细胞) (2氨基联苯胺染色 ×400)
图3 肝移植术后肌纤维母细胞分布(红色箭头所示为肌纤维母细胞) (2氨基联苯胺染色 ×400)
3 讨论
残存的胆管上皮细胞在对损伤做出再生修复时，虽然最终能恢复到近似原先的细胞形态，但在该过程中极有可能经历DNA损伤或基因序列改变，具有和正常细胞不同的功能，分泌多种与器官纤维化密切相关的细胞因子如TGFβ等，促进胆管周围成纤维细胞活化转化为肌纤维母细胞，而后者的持续出现是器官纤维化过程的关键［6］。同时，大量而活跃的细胞分裂需要消耗较多的能量，就有可能削弱肝内非新生细胞正常的能量代谢过程［7］。这对移植物的长期存活及功能是不利的。我们观察到伴随着明显的胆管上皮细胞增殖，较多肌纤维母细胞环绕于冷保存12 h组胆管周围。这表明严重冷保存再灌注诱导的胆管上皮细胞增殖可能是促进肌纤维母细胞聚集的重要因素。由于胆管上皮细胞和胆管周围肌纤维母细胞之间维持着非常精妙的平衡，冷保存再灌注对胆管上皮细胞的严重损伤触发肌纤维母细胞的大量活化，导致胆管壁创面收缩，增加了胆管壁及其周围组织纤维化和胆管狭窄形成的风险，在肝外胆管或肝内大胆管常表现为管腔狭窄，在小胆管则可能出现管腔阻塞［8］。我们还观察到大胆管尤其肝门附近大胆管内壁的胆管上皮细胞增殖最为活跃，该区结缔组织丰富，内含大量成纤维细胞，极易受到胆管上皮细胞增殖的影响而活化为肌纤维母细胞。这也许正是临床观察到的肝门附近大胆管成为移植肝胆道狭窄易患部位的原因之1，也是影响移植物功能与存活的重要因素。
作为1种新型免疫抑制剂，体外和体内实验均证实雷帕霉素抑制胆管上皮细胞增殖，其有效抑制浓度远低于临床肝移植术后患者应用雷帕霉素作为免疫抑制剂时的血药浓度［9］。我们的研究也发现，雷帕霉素明显抑制由冷保存再灌注损伤诱导的胆管上皮细胞增殖，并减少胆管周围肌纤维母细胞的聚集。雷帕霉素是信号转导及转录激活因子3活化的特异性抑制剂，因而部分阻断转录激活因子3介导的信号通路，从而调控细胞周期进展，影响细胞增殖与分化［10］，这可能是其抑制胆管上皮细胞增殖的分子机制之1。同时我们还观察到，雷帕霉素虽然明显抑制肝移植术后胆管上皮细胞的增殖，但并未降低术后14 d内生存率，进1步提示以胆管上皮细胞增殖为靶点的雷帕霉素极可能成为临床防治移植肝胆管周围纤维化、胆管狭窄等并发症的有力武器，将会更广泛地应用于肝移植领域。
【参考文献】
［2］ Ramadori G, Saile B. Portal tract fibrogenesis in the liver. Lab Invest,2004,84(2):153-159.
MAPK信号通路在多种恶性肿瘤（包括卵巢癌）细胞的增殖、凋亡和化疗药物作用及化疗药物耐受发生中起重要作用[4-6]。MAPK家族包括p38 MAPK、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、c-jun氨基末端激酶（JNK）等多个亚家族。这些亚族组成多条信号通路，其中最主要的有P38途径、ERK1/2途径和JNK途径。MAPK家族成员被磷酸化激活后，将细胞外的各种刺激信号传递到细胞内，引起细胞内级联反应，调节细胞的增殖、凋亡及对药物的敏感性[7]。有研究发现激活的AKT和MAPK，依次磷酸化BAD和BCL-2，进而削弱铂类和紫杉烷的促进细胞凋亡作用[8]。笔者前期研究发现MAPK信号通路在晚期上皮性卵巢癌组织中异常激活，并发现磷酸化p38 MAPK在耐药卵巢癌组织中表达较非耐药卵巢癌组织中升高。
二甲双胍是一种用于治疗2型糖尿病的双胍类降糖药，最近两项大型流行病学调查研究表明：长期服用二甲双胍能够降低卵巢癌的发病率，而且二甲双胍能够显著延长卵巢癌合并糖尿病患者的无进展生存期[9]。二甲双胍通过STK11（也称LKB1）激活AMPK，激活过程涉及多个参与细胞增殖调节的信号通路，其中包括MAPK信号通路[10]。但二甲双胍是否能够增加化疗药物对卵巢癌细胞的敏感性及相关的作用机制研究尚属空白。
本研究首先观察二甲双胍对卵巢癌细胞增殖的影响，以及二甲双胍是否可增强顺铂的化疗敏感性，并通过检测二甲双胍对化疗药物相关的重要信号通路MAPK信号通路的调节作用来探讨相关的作用机制。以期寻找能提高卵巢癌化疗敏感性的新的治疗方案。
1 材料与方法
1.1 细胞系和试剂 人卵巢浆液性状囊腺癌细胞系SKOV3，中、高分化，贴壁生长，购于中国医学科学院细胞库，置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养。细胞系常规3～5 d传代。兔抗人p38 MAPK多克隆抗体、兔抗人P-p38 MAPK单克隆抗体；兔抗人AMPK多克隆抗体、兔抗人P-AMPK单克隆抗体，兔抗人GAPDH单克隆抗体购自Cell signaling公司；二甲双胍、顺铂购自美国Sigma公司，胎牛血清购自杭州四季青公司；Western blotting检测试剂盒购自武汉博士德公司；Trizol 试剂购自美国Invitrogen公司；BrdU标记及检测试剂盒购自德国Roche公司。
1.2 方法
1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，组间差异采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 二甲双胍抑制卵巢癌细胞增殖的情况 二甲双胍能够抑制卵巢癌细胞增殖，并且这种抑制作用能够被Compound C所削弱。随着二甲双胍浓度（1×10-3 mol/L，1×10-4 mol/L，1×10-5 mol/L）的增加，其对卵巢癌细胞SKOV3增殖的抑制作用逐渐增强（*P<0.05，**P<0.01）。其中1×10-4 mol/L
和1×10-5 mol/L的二甲双胍能够显著抑制子宫内膜癌细胞的生长。而AMPK阻断剂Compound C（5×10-7 mol/L，1×10-6 mol/L）均可削弱二甲双胍的这种抑制卵巢癌细胞增殖的作用。1×10-6 mol/L Compound C与二甲双胍联合应用，其对卵巢癌细胞增殖的抑制作用与空白对照组比较差异无统计学意义（P>0.05），见图1。
2.2 二甲双胍能够增强卵巢癌对顺铂的敏感性 将不同浓度的顺铂（1、2、4、6 ng/L）加入卵巢癌细胞SKOV3中，加入或者不加入0.1 mM二甲双胍孵育细胞48 h后，结果表明：0.1 mM的二甲双胍联合顺铂（1、2、4、6 ng/mL）作用于卵巢癌细胞时，顺铂抑制卵巢癌细胞生长的作用显著增强（P<0.05）。其中6 ng/mL顺铂联合0.1 mM的二甲双胍对卵巢癌细胞的抑制作用最显著（P<0.05），见图2。
2.3 二甲双胍联合p38 MAPK阻断剂SB203580能够增强二甲双胍的抗卵巢癌细胞增殖的作用 单独应用SB203580（5[dylw.net提供专业写作论文和服务.]、10 ?M）能抑制卵巢癌SKOV3的增殖，差异有统计学意义（P<0.05）。二甲双胍（0.1 mM）和SB203580（5、10 ?M）联合应用对卵巢癌细胞SKOV3增殖的抑制作用显著增强（*P<0.05，**P<0.01）。其中0.1 mM二甲双胍与10 ?M p38 MAPK阻断剂SB203580联合应用对卵巢癌细胞SKOV3增殖的抑制作用最显著（**P<0.01），见图3。
2.4 二甲双胍激活AMPK信号通路，并抑制MAPK信号通路 二甲双胍（10、20 mM）作用卵巢癌细胞SKOV3 6 h后，磷酸化AMPK水平显著增高，且升高的磷酸化AMPK水平能够被AMPK阻断剂Compound C所削弱。经二甲双胍（1、10 mM）处理后，卵巢癌细胞SKOV3中磷酸化p38 MAPK蛋白水平显著降低，见图4。
3 讨论
最近两项大型流行病学资料显示：（1）长期服用二甲双胍可降低卵巢癌的发病风险；（2）在合并糖尿病的卵巢癌患者中，服用二甲双胍的患者较未服用患者的无病进展存活率显著增加[10-11]。笔者研究结果发现，二甲双胍能够抑制卵巢癌细胞增殖，这种作用是通过激活AMPK信号通路实现的。AMP激活蛋白激酶（AMPK）是主要的细胞能量调节器，是代谢和肿瘤互相作用的主要调节子[11]。二甲双胍以一种非胰岛素介导的方式直接调节细胞增殖和凋亡，二甲双胍通过激活AMPK，激活的AMPK调节多个信号通路，其中包括mTOR和MAPK信号通路，最终调节细胞增殖和凋亡。
化疗药物引起的细胞损伤主要是通过、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路实现的，并且化疗药物耐受的形成也与MAPK信号通路激活密切相关[6]。MAPK家族包括P38MAPK、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、c-jun氨基末端激酶（JNK）等多个亚家族。这些亚族组成多条信号通路，其中最主要的有P38途径、ERK1/2途径。MAPK信号通路在多种恶性肿瘤（包括卵巢癌）细胞的增殖、凋亡和化疗耐药产生过程中发挥重要作用[6]。MAPK家族成员被磷酸化激活后，将细胞外的各种刺激信号传递到细胞内，引起细胞内级联反应。有研究发现激活的MAPK，依次磷酸化BAD和BCL-2，进而削弱铂类和紫杉烷的促进细胞凋亡作用，使肿瘤细胞对化疗药物产生抵抗[12]。笔者的研 究结果表明：二甲双胍可能通过激活AMPK信号通路，进而抑制MAPK信号通路来抑制卵巢癌细胞增殖的。这与以上研究结果相一致。
笔者的研究结果还发现：二甲双胍（0.1 mM）能够增强顺铂抑制卵巢癌细胞增殖作用。与最近的几项研究结果一致：二甲双胍能改善乳腺癌化疗耐药，并且发现二甲双胍的这种对化疗耐药的调节作用是通过激活AMPK实现的[13]。Tseng等[16]在非小细胞肺癌细胞中发现二甲双胍不仅能够降低紫杉醇诱导p38 MAPK介导的切除修补基因（ERCC1）的表达，还能够增加紫杉醇诱导的细胞毒效应。另外在肺癌、乳腺癌和前列腺癌裸鼠体内模型中，二甲双胍能够显著增强顺铂、紫杉醇和多柔比星对肿瘤细胞生长的抑制作用，并且二甲双胍能够减少多柔比星的用量，延长疾病缓解期[14-15]。但这些结果说明二甲双胍可能通过激活AMPK调节肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
笔者同时发现，二甲双胍联合MAPK信号通路抑制剂能够增强二甲双胍的抗肿瘤作用。p38 MAPK、p42 MAPK信号通路抑制剂可增加二甲双胍和紫杉醇的抗肿瘤作用[16]。Liu等[17]在乳腺癌中发现二甲双胍和mTOR抑制剂（RAD001）联合可增强化疗药物的细胞毒作用，联合应用二甲双胍、化疗药物和mTOR阻断剂能够[dylw.net提供专业写作论文和服务.]协同抑制乳腺癌细胞增殖。Monteagudo等[18]在前列腺癌细胞中，p42 MAPK siRNA能够显著增强二甲双胍的抗肿瘤作用。因此，铂、紫杉醇化疗的基础上联合二甲双胍和信号通路阻断剂可能会增强卵巢癌化疗的疗效，这些研究结果都与笔者的研究结果一致。
总之，二甲双胍能够提高卵巢癌细胞系SKOV3细胞对顺铂的敏感性，并且这种作用是依赖于AMPK激活的；p38 MAPK阻断剂SB203580也能够抑制SKOV3的增殖，二甲双胍能够增强这种抑制作用。二甲双胍的这种增强卵巢癌细胞对顺铂敏感性的作用可能是通过激活AMPK，从而抑制MAPK信号通路实现的。笔者的研究结果为临床应用二甲双胍及MAPK信号通道阻断剂来提高卵巢癌化疗药物的敏感性提供理论支持，为卵巢癌的临床联合用药提供新思路。
参考文献
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【关键词】 CD24;肿瘤；增殖
Effect of CD24 on cell proliferation capability in melanoma cells
LI Ming, LI Yan, CHEN Wei-qiang, et al.School of Basic Courses, Guangdong Pharmaceutical College, Guangdong 510006, China
【Abstract】 Objective To study the effect of CD24 on the proliferation ability of melanoma cells. Methods B16F10 cells were transfect with pSi-CD24, a siRNA plasmid target to CD24. Then the expression of CD24 was measured by RT-PCR and Western blot and the cell proliferation was assessed by MTT assay. Results CD24 expression was obviously down-regulated by pSi-CD24, and knockdown CD24 can effectively inhibited the proliferation of melanoma cells. Conclusion CD24 can enhance the proliferation of melanoma cells in vitro, which indicated CD24 play an important role in tumor growth.
【Key words】 CD24; Tumor; Proliferation
CD24是一种低分子量高度糖基化的蛋白质粘附分子，作为P-选择素的配体之一，CD24参与介导单核细胞、中性粒细胞与内皮细胞、血小板之间的粘附。近年来，临床研究发现CD24高表达于多种肿瘤细胞表面，并且与肿瘤的预后密切相关［1］。对于其作用机制，以往研究较多的集中的CD24与肿瘤转移的关系上，而CD24在肿瘤增殖中的作用研究尚不十分明确。因此，本实验用siRNA干扰CD24的表达，观察抑制CD24表达对细胞的增殖的影响，初步探讨CD24在肿瘤生长中的作用。
1 资料与方法
1.1 试剂与仪器 引物、分子量Marker和质粒提取试剂盒(大连TaKaRa公司)；两步法RT-PCR试剂盒、Trizol 、Lipofectamine 2000 (美国Invitrogen 公司)；抗CD24 抗体和抗β-actin抗体(美国Santa Cruze公司)；ECL化学发光试剂盒(美国Pierce公司)； 蛋白电泳仪、电转仪、杂交箱和酶标仪(美国Bio-Rad公司)。人黑色素瘤细胞株B16F10为本室保存。靶向CD24的siRNA干扰质粒pSi-CD24由本室构建，按试剂盒说明书提取备用［2］。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养和转染 取对数生长期的人黑色素瘤细胞B16F10细胞，接种于6孔细胞培养板内，待细胞达到80%融合时，按照说明书用脂质体Lipofectamine 2000转染细胞。实验分为对照组和pSi-CD24组。
1.2.2 B16F10细胞中CD24 mRNA表达的变化 转染24 h
后，用Trizol法提取细胞总RNA，按照说明书以Oligo-d(T)18为引物逆转录合成第一链cDNA，用特异性引物扩增CD24和β-Actin。引物序列和扩增方法见本课题组前期发表的论文［2］。PCR产物用1.5%琼脂糖电泳，拍照，观察。
1.2.3 B16F10细胞中CD24蛋白表达的变化 转染48 h后按照试剂盒操作步骤提取细胞总蛋白，取20 μg样品煮沸变性后进行SDS-PAGE电泳，转膜，5 %的脱脂奶粉37℃封闭1 h，加抗CD24(1∶1000)或抗β-Actin(1∶1000)单克隆抗体，4℃孵育过夜，洗膜，加辣根过氧化物酶标记的相应二抗稀释液(1∶3000) 37℃孵育1 h，ECL法显影，常规洗片拍照。
1.2.4 pSi-CD24对B16F10细胞增殖的影响 取空白对照组和pSi-CD24组细胞细胞，接种至96孔板上，各组设4孔，在转染后0、24、48和72 h后加入MIT(5 mg/m1)20 μl，用MTT法检测细胞增殖情况，并绘制细胞生长曲线。
2 结果
2.1 pSi-CD24对CD24 mRNA和蛋白表达的影响 RT-PCR和Western blot结果显示，在正常情况下，黑色素瘤细胞B16F10高表达CD24，而转染重组质粒pSi-CD24后，B16F10细胞中CD24 mRNA和蛋白水平的表达均明显降低，说明重组质粒pSi-CD24能抑制CD24的表达。结果见图1。
2.2 pSi-CD24对B16F10细胞增殖的影响 MTT结果显示，转染pSi-CD24质粒后，黑色素瘤细胞B16F10的增值明显被抑制，在48 h和72 h与对照组差异有统计学意义。结果见图2。
3 讨论
RNA干扰(RNA interference, RNAi)是一种简单有效的基因沉默工具，主要通过诱导序列特异性的mRNA降解，从而产生相应的功能表型缺失，现已被广泛应用于基因治疗和功能基因组学的研究中［3］。在哺乳动物细胞的RNAi研究中，通过质粒等表达载体在细胞内直接转录形成siRNA具有经济和容易操作、作用持续时间长等优点，是目前siRNA最常用的方法。我们前期采用具有RNA聚合酶Ⅲ启动子的pSilencer 3.1载体，成功构建了靶向CD24基因的表达载体pSi-CD24［2］。本实验用RT-PCR和Western blot在黑色素瘤细胞B16F10中发现，转染pSi-CD24质粒后细胞CD24在mRNA水平和蛋白水平的表达较对照组均有明显降低，说明pSi-CD24可以在细胞内持续表达siRNA, 高效特异地抑制CD24的表达，为进一步研究CD24基因的功能和以CD24为靶点进行肿瘤治疗奠定了基础。
作为P-选择素的配体，CD24高表达能增强肿瘤的侵袭能力和转移能力［4］。研究发现，在病理情况下CD24和P-选择素介导了肿瘤细胞与血小板及内皮细胞的粘附与结合，肿瘤细胞与血小板结合后，形成血小板血栓，可以保护肿瘤细胞逃避免疫监视，降低免疫细胞对肿瘤的杀伤效应；肿瘤细胞和内皮细胞的粘附则有助于肿瘤细胞从循环系统转移到组织中形成转移灶，因此，CD24/P-选择素的结合被认为与肿瘤转移密切相关。还有研究证实CD24也介导了肿瘤细胞与纤维粘连蛋白等细胞外基质的粘附作用，敲除CD24可以降低SW620细胞的粘附能力［5］。CD24对肿瘤的生长也具有调控作用，Smith等发现敲除CD24基因导致肿瘤细胞凋亡增加［6］。有学者认为这与CD24能促进肿瘤微血管形成有关，也有研究认为与CD24促肿瘤细胞生长有关。本实验利用siRNA技术敲除黑色素瘤B16F10细胞CD24基因表达，发现抑制CD24表达可以降低细胞的增值能力，说明CD24可能通过某些信号途径促进肿瘤细胞增殖，进一步证实了上述结果。
综上所述，CD24在多种肿瘤中高表达，与肿瘤的生长、粘附和转移密切相关，抑制CD24表达可以降低肿瘤细胞的增殖能力、诱导肿瘤细胞凋亡、阻碍肿瘤的转移，因此CD24可能是一个治疗肿瘤的新靶点，但对其作用机制尚需进一步的深入研究。
参 考 文 献
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[关键词] 胎盘 细胞凋亡 bcl-2 bax ki67
[论文] 人类胎盘不仅在胎儿—胎盘—母体的关系上起中心轴的作用，而且功能上失调会导致母体和胎儿的病理性变化，随着妊娠的进展，绒毛和滋养层不断成熟和分化，已发现许多物质包括原癌基因产物，在胎盘有生理性的表达。胎儿的发展特征是细胞群增殖和诱导或抑制细胞凋亡成熟起来的，因此，胎盘在妊娠期间也经历着相似的变化。我们通过测定胎盘组织中细胞凋亡调控基因bcl-2、bax及细胞增殖基因ki67，进一步探讨了妊娠高血压综合征（PIH）的病理性变化。
1 资料与方法
1.1 临床资料 随机选择1998年11月至1999年4月白求恩医科大学第二临床医院及长春市妇产医院妇科门诊及产科病房的孕产妇66例。（1）妊高征组36例，平均26.14±3.42岁，平均孕37.44±3.9周，轻度9例，中度10例，重度17例；(2)正常妊娠组30例，孕早期10例，平均25.25±3.80岁，平均孕9.03±1.11周；孕中期5例，平均26.55±3.93岁，平均孕24.05±3.63周；孕晚期（对照组）15例，平均27.76±3.38岁，平均孕39.82±1.32周。
1.2 标本采集及处理 孕早期是行人工流产术者，孕中期是来自无妊娠合并症、并发症，要求终止妊娠而行水囊引产者，孕晚期为单胎足月初产妇，无妊娠合并症、并发症、以自然分娩及择期剖宫产手主结束分娩，其剖宫产指标主要是头盆不称及社会因素。妊高征组孕妇是无慢性高血压、慢性肾炎及其它心肾疾病的病史者。
早孕绒毛组织不需进一步处理，取出后用生理盐水冲洗净，即用10%福尔马林液固定。中、晚期胎盘组织于分娩后立即在母体面（避开钙化、机化灶）随机取3个不同区域约2cm×2cm×2cm胎盘组织，生理盐水冲洗干净后立即放入10%福尔马林固定液中。
1.3 方法 用免疫组化SP法，抗bcl-2、抗bax、抗ki67单克隆抗体即用型及SP试剂盒均购自福州迈新生物工程公司。每次染色均设阳性和阴性对照。
1.4 结果判定 由2名医师独立观察切片中10个高倍视野。（1）阳性标准：SP法显示bcl-2及bax定位于胞浆和胞膜内，反应产物为棕黄色。根据显色程度分为4级：（-）为无着色，（+）为淡黄色，（++）为棕黄色，（+++）为棕褐色;（2）SP法显示ki67以细胞核呈清晰棕褐色为阳性，按阳性细胞占C-cells的比例分为：阳性细胞数＜10%为（-）；10%-20%为（+）；20%-30%为（++）；＞30%为（+++）。
1.5 统计学分析Fisher精确概率检验法，两组计数资料用等级相关分析。
2 结果
2. 1 正常妊娠期胎盘组织中bcl-2、bax及ki67的基因表达bcl-2表达主要定位在绒毛的S-cells，而bax在S-cells和C-cells均呈阳性，同时在绒毛间质中bax也呈阳性表达，但强度低于滋养层细胞；ki67蛋白主要定位在C-cells。bcl-2在晚期妊娠组的阳性率明显低于早、中期妊娠组（P＞0.05）；ki67在晚期妊娠组的阳性率明显低于早、中期妊娠组（P＜0.01）。早、中、晚期妊娠组bcl-2的表达强度与ki67的表达强度无相关性（P＞0.05），bax与ki67也无相关性（P＞0.05）。
2 .2 妊高征与正常晚期妊娠胎盘组织中bcl-2、bax及ki67的基因表达bcl-2的阳性率在对照组与PIH两组间差异无显著性（P＞0.05），bax两组差异无显著性（P＞0.05），对照组ki67的阳性率明显低于PIH组（P＜0.01）。bcl-2与ki67的表达强度无相关性（P＞0.05），bax与ki67也无相关性（P＞0.05）。
2.3 妊高征胎盘组织中bcl-2、bax及ki67的基因表达bcl-2的阳性率在轻、中、重度PIH3组间差异无显著性（P＞0.05），bax在3组间差异也无显著性（P＞0.05），而ki67在轻度PIH组的阳性率明显低于中、重度组（P＜0.01）。PIH轻、中、重度组妊娠bcl-2的表达强度与ki67的表达强度经等级相关分析无相关性（P＞0.05），bax与ki67也无相关性（P＞0.05）。
3 讨论
3.1 正常妊娠与妊高征胎盘组织bcl－2、bax的基因表达bcl－2是细胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫组化已确定bcl－2定位在S－cell表达，并且从正常早孕到晚期妊娠持续出现[3，6]，因此保留滋养层细胞团可能是维持妊娠的一种机制[1]。晚期妊娠bcl－ 2表达下降、可能是因为bcl－2正常生理性功能，在孕晚期组成胎盘的细胞不再需要存活，可能是细胞凋亡的一种早期生物学变化，也可能与分娩有关[2]。
目前已知bcl－2和bax是bcl－2家族中重要成员。bcl－2表达水平较高时，可形成bcl－2和bax的异源二聚体，细胞凋亡受到抑制； bax表达水平较高时，可形成bax－bax同源二聚体，加速细胞凋亡。本研究中，对照组bcl－2与bax的阳性率为66．7％与80％，PIH组的阳性表达均为75％，表明大多数胎盘组织均呈bcl－2与bax高表达。bcl－2和bax表达已在一定水平上达到平衡，所以在胎盘组织中不起介导细胞凋亡的主导作用。
PIH组的bax并无随病情的严重程度而有下降的趋势，说明bax会进一步影响妊娠的结局，反映病情的严重程度。这些结果可能提示，胎盘的细胞凋亡并不是bax单独起作用，但有待进一步证实。
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