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【关键词】牡丹皮；正交设计；提取工艺；芍药苷；高效液相色谱法
牡丹皮为毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的干燥根皮，具有清热凉血，活血化瘀的功效。牡丹根皮中含芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、丹皮酚、丹皮酚苷、丹皮酚原苷和丹皮酚新苷等成分。药理实验表明，芍药苷体内、体外均能抑制ADP或胶原诱导的血小板聚集［1］，应属牡丹皮抗缺血性中风的主要有效成分之一。本文采用正交实验法，以HPLC法测定的芍药苷的提取量为指标，对牡丹皮乙醇提取工艺进行优选，为牡丹皮的开发应用提供了实验依据。
1仪器和试药
高效液相色谱仪：日本岛津10Avp高效液相色谱仪(LC10Atvp双泵，SPDM10Avp二极管阵列检测器，SIL10Advp自动进样器，CTO10Avp柱温箱);HypersilODS填料色谱柱(ID4.6×250mm)(大连依利特化学仪器有限公司);分析天平：LIBRORL16ODTP分析天平(日本岛津)、AE240分析天平(瑞士METTLER);芍药苷对照品(07369710)：中国药品生物制品检定所(为含量测定用)。牡丹皮药材(购自四川省电江药材基地，经鉴定为牡丹皮正品)，所用乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2提取工艺研究
2.1方法本文采用乙醇加热回流法对牡丹皮进行提取，选择回流次数、乙醇浓度、回流时间和乙醇用量等4个主要影响因素，每个因素选取3个水平。选用L9(34)正交实验法进行实验，选定的因素水平表见表1。
表1因素水平表（略）
2.1.1色谱条件经试验，确定流动相为乙腈水(20：80)，流速1ml/min，柱温40℃，测定波长为230nm进样量4μl。
2.1.2对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品2.40mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含芍药苷96μg)。
2.2供试样品溶液的制备精密称取9份牡丹皮药材粗粉50g，按L9(34)表各试验号规定方法进行实验，提取液分别浓缩并转移至100ml容量瓶，用适量乙醇稀释至刻度，摇匀，静置，即得样品溶液。精密吸取上述样品溶液各1ml，分别置25ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试样品溶液。
2.3供试样品溶液测定及结果精密吸取供试样品溶液与对照品溶液各4μl，注入液相色谱仪，测定，计算出供试样品溶液中芍药苷的浓度，结果见表2；方差分析见表3。
表2正交试验设计及结果（略）
由以上结果可知，牡丹皮乙醇提取的最佳工艺条件确定为A3B2C1D1，即5倍量75%乙醇提取3次，每次1h。
表3方差分析（略）
3小结
3.1芍药苷为牡丹皮中主要活性成分之一，其含量测定方法较多，如毛细管区带电泳法［2］，薄层扫描法［3］，高效液相色谱法［4-5］等。笔者采用HPLC法进行实验，并进行了相应的方法学试验。结果表明本法各方面符合中华人民共和国药典(2005版)和中药新药研制的有关规定。在试验中，根据牡丹皮含量测定结果，制定了牡丹皮中芍药苷的含量限度，为控制实验用牡丹皮药材的质量提供了依据。本文所选含量测定方法操作简单，结果准确，重现性好。
3.2关于芍药苷含量测定方法中流动相的选择，曾选用乙腈水(10：90、20：80、30：70)和甲醇水(20：80、30：70、40：60)等依次进行实验，结果显示乙腈水(20：80)作流动相时，牡丹皮供试品色谱中芍药苷与杂质峰可达基线分离，峰形对称，且保留时间适宜，故采用乙腈水(20：80)作为流动相。
3.3有文献记载以水提醇沉法提取丹皮中芍药苷［6］，但考虑到芍药苷醇溶性优于水溶性，在前期实验中经比较，水提醇沉提取物中芍药苷得率低于乙醇提取物，且其操作较繁，故本文直接采用乙醇提取法，正交实验得出最佳提取工艺条件为乙醇浓度75%，乙醇用量为药材量的5倍，加热回流时间为1h，回流次数为3次。
致谢；河南省驻马店市药品检验所
【参考文献】
［1］洪涛，张家勋，李嘉珏，等.中国野生牡丹研究(一)［J］.中草药,1994,(4):16.
［2］沈保安.药材牡丹皮的原植物·芍药属一新种［J］.植物分类学报，1997，35(4):360.
［3］洪德元，潘开玉，谢中稳.银屏牡丹·花王牡丹的野生近亲［J］.植物分类学报，1998，36(6):515.
［4］黄泰康.常用中药成分与药理手册［M］.北京：中国医药科技出版社，1994.
【关键词】舒督丸提取溶剂提取工艺柚皮苷
StudiesontheExtractionProcessofShuDuPill
Abstract：ObjectiveToselecttheextractionsolventandconditionsofShuDuPill.MethodsAceticacidwrithingmethodonmicewasusedtocomparetheanalgesiceffectsofthewaterextractandthealcoholextractorthogonaldesignwasusedtooptimizethereasonableextractionconditionswiththeevaluationmarkerssuchasnaringinextractionrateandwaterextract.ResultsTheanalgesiceffecttreatedwiththewaterextractismoresignificant.Theextractionconditionswereasfollows：themedicalmaterialwassoakedin6，4，4，2timeswaterandboiled4times,3，2，1，1hoursforeachtime.ConclusionTheextractionconditionsestablishedcanmaketheextractionrateofactivecomponentshighandmakethetherapyandqualityoptimal.
Keywords：ShuDuPill；Theextractionsolvent；Theextractionprocess；Naringin
舒督（浓缩）丸是治疗强直性脊柱炎的中成药，由骨碎补、桑寄生、狗脊、络石藤、牛膝等药味组成。根据强直性脊柱炎的病因与临床症状，方剂中药物的抗炎镇痛、活血祛瘀、调节免疫功能等是其主要药理作用。据文献报道［1～3］，骨碎补中的柚皮苷与络石藤中的木犀草素等有抗炎作用；桑寄生中的槲皮素等具有镇痛作用；牛膝中的多糖等成分有改善机体免疫功能等多种药理活性。这些成分的溶解性较复杂。根据强脊炎疼痛症状突出的临床表现，本研究以小鼠镇痛药效试验为指标，对该方剂的提取溶剂进行了筛选，并以柚皮苷提取率和水总浸出物提取率为评价指标，采用正交设计优选其提取工艺条件。
1器材
1.1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱。柚皮苷中国药品生物制品鉴定所（批号：110722200309，含量测定用）。所用试剂均为分析纯，含量测定试剂为色谱纯。药材购于河南省药材公司，骨碎补药材中柚皮苷含量为0.75%。
1.2实验动物
昆明种小鼠，河南省实验动物中心提供（许可证号：SYXK（豫）20050012），雌雄各半，体重18～22g。河南省食品药品检验所动物室许可证号：SYXK（豫）20050011。动物饲料为标准颗粒饲料，购自北京科奥协力饲料有限公司（许可证号：SCXK（京）20050007）。
2方法与结果
2.1提取溶剂的选择
2.1.1供试样品的制备
按处方比例称取药材两份，一份水煎煮两次（6倍量/2h，4倍量/1h），另一份75%乙醇回流2次（6倍量/2h，4倍量/1h）过滤，合并药液，减压浓缩，分别制成1.0g原生药/ml的流浸膏，密封，灭菌，备用。
2.1.2药效试验
取小鼠60只，雌雄各半，随机分组，灌胃给药，用醋酸扭体法比较不同溶剂提取物的镇痛效果［4］。结果见表1。表1舒督丸不同溶剂提取物对小鼠疼痛的抑制作用（略）
药效试验结果显示，舒督丸不同溶剂提取物均可抑制小鼠疼痛，其中以水提物镇痛效果最好。因此，确定以水为提取溶剂。
2.2提取工艺因素的优选
2.2.1柚皮苷的含量测定方法［5］
2.2.1.1色谱条件
ZOPBOXISBC18（4.6mm×200mm，5μm）色谱柱；流动相甲醇醋酸水（35∶4∶65）；检测波长283nm。
2.2.1.2对照品溶液的制备
精密称取柚皮苷对照品20mg，甲醇定溶于100ml量瓶中，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升含柚皮苷60μg）。
2.2.1.3供试品溶液的制备与测定
取含相当于骨碎补0.3g的提取液，稀硫酸调pH值3～4,水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,于283nm处测定并计算柚皮苷含量，计算提取率。
2.2.2水总浸出物的测定方法
分别精密量取水提药液各25ml，按浸出物测定法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录XA）操作，以25ml提取液相当于原药材量作为分母，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的浸出率。
2.2.3提取工艺因素与水平的正交实验选择加水量、提取时间和提取次数3个因素，每个因素选择3个水平，见表2。用L9（34）正交表进行正交实验设计。表2实验因素水平表（略）
取复方饮片9份，每份354g，按表3正交表设计方案进行回流煎煮提取，合并提取液，滤过，吸取药液适量，测定柚皮苷含量和水总浸出物量，计算提取率，见表3。表3舒督丸提取工艺正交实验方案与结果（略）
2.2.4舒督丸提取工艺因素的正交试验结果与分析结果见表3～4。表4舒督丸提取工艺正交试验结果方差分析（略）
由综合评分直观分析可知，上述因素中，B因素影响最明显，应取3水平；C因素次之，应取3水平；A因素应取2水平。
由上表可看出，显著影响提取效率的工艺因素是B。取重要因素较高水平的组合，得到最佳工艺条件为：A2B3C3。即提取4次，每次分别为3，2，1，1h，每次加水量分别为6，4，4，2倍。
2.3验证实验
取复方饮片，按最佳工艺条件重复提取3次，测定柚皮苷和水总浸出物得率。结果见表5。表5验证实验结果（略）
从上述试验结果可以看出:所筛选出来的工艺合理可行,稳定可靠,具有可操作性和重现性。
3讨论
3.1舒督丸方剂中有效成分既有水溶性，也有脂溶性的，理论上既需要用亲脂性溶剂也需要用水提取，才能使有效成分充分溶出。但是复方中各药材成分间在提取时往往会发生复杂的相互作用，从而使有效成分溶解度及存在状态发生变化影响到药效。因此，采用药效学方法筛选提取溶剂,与常规的化学法相比,其筛选结果与临床用药效果更为接近。本实验以小鼠醋酸扭体法比较该方剂水和乙醇为溶剂的提取物的镇痛效果，结果表明以水为溶剂效果优于乙醇，与该药原配制用溶剂产生的疗效一致。
3.2由药材成分浸出原理可知，溶剂对药材的浸润与渗透、溶解与解吸和成分扩散置换过程，在第1次提取即已经完成，后续的多次提取，主要是更换溶剂，保持浓度差。所以，在本研究中，每个煎煮时间和加水量水平设计为依次递减。结果证明优化出的提取工艺参数可以使有效成分达到较高的提取率，节省了大量的工时，降低了水和能耗。
3.3在柚皮苷含量测定时发现复方提取物中柚皮苷提取率很低，与其溶解性能不符。通过对方中骨碎补与其他药材两两配伍提取实验发现，是由于其与桑寄生中某成分形成了水溶性络合物，影响了柚皮苷的含量测定。实验发现该络合物在酸性溶液中能够迅速解离，可以避免对柚皮苷含量测定的干扰，故在测定复方中柚皮苷含量时，需用稀硫酸调节溶液pH至酸性。
【参考文献】
［1］国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册［M］.北京：人民卫生出版社，1986：761，680.
［2］宋必卫，田薇，刘颖雪，等.槲皮素镇痛作用研究［J］.安徽医科大学学报，1994，29（3）：168.
［3］赵兴梅，徐光忠，李建利，等.川牛膝和怀牛膝的现代药理研究概况［J］.华西药学杂志，2004，19(3)：205.
【关键词】银翘合剂提取工艺
Abstract:ObjectiveToresearchtheextractionprocessofYinqiaoMixture.MethodsThreefactors，includingthewatervolume,thetimeofdistillation,thetimesofdistillationwerestudiedwithorthogonaldesign〔L9（34）〕.Eachfactorhadthreelevels.Totalextractandchlorogenicacidweremarkers.Theextractingtimeforvolatileoilfromherbaschizonepetae，herbamenthaeandfructusforsythiaewasstudlied.ResultsTheoptimalwaterextractionprocesswasthatherbsweredistilledforthreetimesbyaddingwater，whichwas6timesamountoftheherbs，40minutesonceatime.ConclusionThismethodcanbeusedastheextractionprocessforYinqiaoMixture.
Keywords:YinqiaoMixture；Extractionprocess
银翘合剂由金银花、连翘、甘草等中药组成，具有辛凉解表、清热解毒的作用，用于感冒、咳嗽、发热、口干、头痛、咽痛等治疗。本实验用不同指标对其提取工艺进行了研究。结果如下。
1仪器与试药
1.1仪器
Agilent1100高效液相色谱仪：四元泵（G1311A）；柱温箱（G1316A）；VWD检测器（G1314A）；紫外检测器软件：AgilentChemstation；101-1A型电热鼓风干燥箱，南通沪通制药机械设备厂；KQ-1000E型医用超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；1/10万电子分析天平(BP-211D型，德国Sartorius)。
1.2试剂与药品
绿原酸对照品（含量测定用，批号0805-9703），购自中国药品生物制品检定所；高效液相色谱所用试剂为色谱纯；水为超纯水；其他试剂为分析纯。所用中药材均购于江苏省药材公司，并由本室专家鉴定。
2方法与结果
2.1色谱条件［1］
色谱柱为Aps-2HYPERSILThermo；VWD检测器；流动相为乙睛∶0.4%磷酸溶液=9∶91；检测波长327nm；柱温30℃；流速1ml/min；进样量10.0μl。
2.2对照品溶液的制备及回归方程精密称取绿原酸对照品6.77mg，加50%甲醇溶解制成每毫升含绿原酸0.2708mg的对照品溶液。用50%甲醇分别稀释为0.1354，0.0677，0.03385，0.01693，0.00846，0.00423，0.00213，0.00106μg/μl的对照品溶液。各浓度对照品溶液10.0μl，按以上色谱条件进行分析，以进样量为横坐标X（μg），峰面积积分值（mAu）Y为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=4104.23650X-2.98105，r=0.99998。绿原酸的量在0.0106～1.354μg范围内呈良好的线性关系。
2.3样品处理及实验结果影响提取效果的主要因素有提取加水量，提取时间，提取次数3个因素，每个因素选择3水平，以绿原酸的量及浸膏量为指标（权重值分别为70%，30%）进行正交实验，优选出最佳工艺条件。因素水平见表1。表1因素水平（略）
按处方比例称取金银花，连翘等药材56g按表2进行正交实验，合并各次提取液浓缩并定容至100ml，作为供试品溶液。取供试品溶液2ml，加50%甲醇稀释定容至50ml，超声10min，离心10min，取上清液2ml，加50%甲醇稀释定容至10ml，微孔滤膜（0.45μm）滤过，取10.0μl进样。利用回归方程计算出绿原酸的进样量（μg），绿原酸量（mg）=绿原酸的进样量×1250。在上述供试品溶液取2ml，恒重，得干浸膏量m（mg），浸膏量（mg）=m×50。方差分析结果见表3。（注：m即为2ml药液恒重所得干浸膏重）。表2正交实验设计方案及数据分析（略）
表3方差分析（略）
2.4挥发油提取工艺的研究用挥发油测定法分别对荆芥穗、薄荷、连翘三药材对提取时间进行研究。分别称取药材500g，加6倍水量，加热回流，考察。结果见表4。表4挥发油提取率-时间（略）
2.5优选工艺验证按处方比例称取各药材56g，平行两份，加6倍量水，加热回流提取3次，40min/次，合并各次提取液浓缩并定容至100ml，作为供试品溶液。取供试品溶液2ml，加50%甲醇稀释定容至50ml，超声10min，离心10min，取上清液2ml，加50%甲醇稀释定容至10ml，经微孔滤膜（0.45μm）滤过，取10.0μl进样。利用回归方程计算出绿原酸的进样量（μg），绿原酸量（mg）=绿原酸的进样量×1250。在上述供试品溶液取2ml，恒重，得干浸膏量m（mg），浸膏量（mg）=m×50。结果见表5。表5优选工艺验证（略）
3讨论
从方差分析的结果表明，提取的次数有显著差异，其它两因素无显著差异，结合直观分析，确定工艺为A3B3C3，但加水量、提取时间对提取效果影响不大。考虑节约成本，缩短工艺时间，拟考虑为A1，C1。
分别对3味有挥发油的药材进行了考察，结果在两小时内其挥发油均能较完全提取，提取率达90%以上。其提取时间与水提工艺时间相同即可。
验证实验结果表明，该工艺可行。即以加6倍量水，加热回流提取3次，40min/次，为最佳提取工艺。
【关键词】小檗碱提取工艺黄连黄柏三颗针正交实验
Abstract:Beingthecommonmedicine,berberinehasextensiveapplicationsinclinicalpharmacy.Therehavebeenmanystudiestoimprovetheyieldingrateofberberineinrecentyears.Thearticlesumsupstudiesontheextractingtechnologyofberberine.
Keywords：Berberine;Extractiontechnology；RhizomaCoptidis；PhellodendronamurenseRupr；Berberis；Orthogonaltest
小檗碱又称黄连素，广泛分布在植物界，大约有4个科10个属植物都已发现有小檗碱存在。小檗碱是黄色针状晶体，表现为季铵型、醇型3种互变异构体，其中以季铵碱型最稳定。小檗碱能缓慢溶解于冷水（1∶20）或冷乙醇（1∶100），在热水或热乙醇中溶解度比较大，难溶于丙醇、氯仿或苯，盐类的溶解度都比较小，硫酸盐在水中的溶解度约为1∶30，盐酸盐微溶于冷水。小檗碱可从三颗针、黄连、黄柏等植物中提取。由于黄连生长缓慢，价格较高，黄柏来源也较少，现我国主要应用三颗针作为提取原料。
小檗碱是临床上一种常用的广谱抗菌药，主要用于菌痢、胃肠炎、痈肿等细菌性感染。现代研究证明小檗碱有抗肿瘤、抗心率失常、降压、降血糖等作用，在临床上有越来越广泛的应用，需求量日益增加。为提高小檗碱提取效率，近些年来对小檗碱提取工艺的研究很多，本文对这一方面作一综述。
1酸水法提取小檗碱
酸水法是目前工业生产提取小檗碱常用的方法。从三颗针中提取小檗碱,常用多倍量的0.3%硫酸水溶液浸泡24h，滤液用石灰乳调pH值至12，过滤，滤液用盐酸调pH值到2～3,再加入6%左右的精制食盐,使食盐完全溶解,放置过夜,抽滤得盐酸小檗碱粗品［1］。或用0.5%的硫酸水溶液冷浸提取,酸水液用石灰乳调pH值到7左右,滤液浓缩用盐酸调pH值到2～3，再加入6%左右的精制食盐,使食盐完全溶解,过滤，沉淀溶于热水，加石灰乳调pH值到8.5～9趁热过滤,滤液再用盐酸调pH值到2～3，放冷过滤得盐酸小檗碱粗品［2］。廖志新等［3］以产于青海等地的三颗针为原料，采用正交实验法，对酸水法提取盐酸小檗碱的生产工艺进行研究，找出了最佳的提取工艺。根据实验结果，盐酸用量达到pH=1，浸提剂量也应在浸透材料量之上超出两倍，食盐用量应使提取液浓度达到5%～7%；浸提总时间应达到12～24h，浸提剂温度控制在80℃至沸点之间；浸提剂浓度（即硫酸浓度）为0.5%～0.7%最佳。黄祖良等［4］报道从十大功劳根粗粉中提取小檗碱,用0.5%左右硫酸溶液浸泡24h,次日,把浸泡液倾出,浸泡液(收集8～10倍量浸泡液,后50%留作下一批套用),用浓盐酸调pH值到1.5左右,按10%(W/V)的量加入精制食盐放置过夜,滤取析出的盐酸小檗碱粗品晒干,盐酸小檗碱提取率为1.23%。据庞小雄等［5］报道，采用正交实验优选三颗针中小檗碱的提取工艺，根据盐酸小檗碱的提取条件，选定浸泡时溶剂的用量，稀硫酸的浓度，石灰乳沉淀的pH值两个因素，确定最佳工艺溶剂的量是药材的16倍，稀硫酸浓度为0.2%,加石灰乳沉淀杂质时的pH值为9,精制时调酸的温度是60℃。肖美凤等［6］报道,用正交实验法对黄连中小檗碱提取工艺进行优选,采用分光光度法测定盐酸小檗碱的含量,其最佳提取工艺是0.4%硫酸水溶液,16倍量的溶剂,石灰乳调pH值到10,精制时加入酸的温度不低于50℃,该工艺经济实用,小檗碱提取率较高。孙波等［7］就水提法部分进行正交优选，确定水提法用水煎煮3次，3.5h,加水量14倍为最佳工艺。预实验中,结果表明用0.5%酸水作溶媒提取最佳。吕霞［8］报道用0.5%硫酸水溶液提取黄连中小檗碱，分别采用索氏提取、超声提取和浸渍提取，HPLC法分析小檗碱浓度分别为16.401，14.246，13.415μg/ml。方阵等［9］优选黄连的最佳酸水提取工艺为2%的盐酸,12倍量的水，回流3次，1.5h/次。
2石灰乳法提取小檗碱
石灰乳法也是当前工业生产上常用的方法。如用渗漉法从黄柏中提取小檗碱，称取黄柏粗粉200g置大蒸发皿中，加入石灰乳搅拌均匀，常法装渗漉桶，加入饱和石灰水浸泡6h后渗漉（pH值在10以上），控制流速5～6ml/min，收集渗漉液2000ml，加入渗漉体积7%（质量浓度）的固体食盐，搅拌后放置过夜，过滤，沉淀，用热水溶解，趁热过滤。滤液加盐酸调pH值为2，放置过夜，过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，抽干后于80℃下干燥，即得盐酸小檗碱粗品［10］。黄祖良等［4］从十大功劳中提取小檗碱，用石灰乳适量搅拌均匀，用水浸渍24h后用水渗漉，收集渗漉液适量，用浓盐酸调pH值为1.5左右，按10%（W/V）加入食盐放置过夜，滤取析出的盐酸小檗碱粗品晒干，盐酸小檗碱提取率为1.17%。石灰乳法用大量的石灰乳可能引起成分损失，也浪费盐酸，增加了生产成本。尹蓉莉等［11］从黄柏中提取盐酸小檗碱,比较几种传统的提取方法,有酸水法、石灰乳法和醇提法等,并加以改进,结果证明,石灰乳法提取效率优于其他方法。
3乙醇法提取小檗碱
通常黄连根粉用乙醇温浸，回收大部分乙醇，剩余乙醇浓缩液放置，过滤，滤液加盐酸、沉淀、放置，过滤得黄色沉淀为盐酸小檗碱粗品［12］。或用加热回流提取，称取一定量的黄连切碎，放入250ml圆底烧瓶中用100ml乙醇作提取溶媒，热水浴加热回流30min，放置浸泡1h，抽滤，滤渣重复上述处理两次，合并3次滤液，减压蒸出乙醇直到为棕红色糖浆状。在棕红色糖浆状物中加入1%醋酸（约30～40ml）加热使溶解，抽滤以除去不溶物，然后于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊为止，放置冷却，最好用冰水冷却，即有盐酸小檗碱析出，抽滤，结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，干燥，烘干称重。席国萍等［13］报道，设计用乙醇法提取小檗碱的正交实验方案，通过方差分析，得到黄连中小檗碱最佳提取工艺为：温度为60℃，9倍体积50%乙醇，提取两次，1h/次，小檗碱提取率为91%以上，平均回收率为97.38%，相对标准偏差为1.48%。黄祖良等［4］研究用75%乙醇回流提取十大功劳根茎粗粉至无色，提取液减压回收乙醇后，用热水溶解，趁热过滤，滤液中加浓盐酸调pH值为1.5左右，按10%（W/V）加入食盐放置过夜，滤取析出的盐酸小檗碱粗品晒干，盐酸小檗碱粗品提取率为3.47%，粗品中盐酸小檗碱含量为38.96%，盐酸小檗碱的提取率为1.35%。吕霞［7］报道用95%乙醇为溶媒，采取索氏提取法，HPLC法分析小檗碱浓度为17.504μg/ml，用95%乙醇、75%乙醇浸渍提取，所得小檗碱的浓度分别为12.120，14.465μg/ml，可见索氏提取明显优于浸渍。刘圣等［14］用正交实验法考察黄连中小檗碱最佳提取工艺为：溶剂为6倍量80%乙醇，乙醇中硫酸加入量为0.25%，提取时间为1.5h/次，提取次数为3次，以该工艺制备的盐酸小檗碱精制品含量在90%以上,适合工业化生产。张乐佳等［15］报道黄连总碱的浸出量与溶剂量，溶剂种类，浸提时间等因素有关,黄连最佳提取工艺是：50%乙醇回流提取3次,每次10倍量溶剂，提取2h。罗音久等［16］用正交设计筛选醇提工艺的最佳条件是黄连须粗粉中加入5%的中药提取因子，37℃恒温浸泡6h，乙醇连续回流3次，1h/次，总加醇量22倍，所得盐酸小檗碱总量最高，为3.81%。黄传俊等［17］采用正交实验法，以黄连提取的收膏率和盐酸小檗碱提取量为考察指标，利用HPLC法测定盐酸小檗碱的含量，结果表明最佳提取工艺是黄连粗粉加8倍量60%的乙醇回流提取3次，1h/次。邢俊波等［18］报道用正交法优选黄柏中小檗碱的提取工艺是7倍量的70%乙醇热回流提取两次，2h/次提取率最好。张学顺等［19］报道比较黄连不同提取方法所得提取液的整体成分及小檗碱的含量，确定最佳提取条件，采用反向色谱柱，以乙腈磷酸二氢钾溶液（47∶53）1000ml加入SD1.7g为流动相，结果显示，75%乙醇索氏提取法所得小檗碱含量最高。
4超声波提取小檗碱
常规提取小檗碱一般费时费力，效率低，而借助于超声技术却可得到显著效果。超声波提取技术是利用超声波产生的强烈振动，高的加速度，加速药物有效成分进入溶剂，从而提高了提出率，缩短了提取时间，并且免去了高温对提取成分的影响。
郭孝武［20］报道应用超声技术从黄连根茎中提取黄连素的工艺参数与常规浸泡法相比，超声提取具有省时、提出率高等优点。在研究从黄连根茎中提取小檗碱时，分别对超声波处理、超声波频率及硫酸浓度等进行了观察，结果表明用20kHz超声波提取30min浸泡24h，提取率相同（8.12%）。核磁共振波仪对提取产物研究说明超声波对小檗碱结构无影响。超声波用于从黄连中提取小檗碱的常规碱性浸泡工艺中，超声波提取30min所得到的小檗碱提取率比碱液浸泡24h高50%以上［21］。吕霞［7］报道用超声波提取法从黄连中提取小檗碱，称取黄连粗粉2.0g四份，分别用纯水，95%乙醇，75%乙醇，0.5%H2SO4溶液超声提取30min，过滤，滤渣按上述方法再重复提取两次。实验结果用HPLC法分析了各提取液的小檗碱浓度表明用75%乙醇超声提取所得的小檗碱浓度最高（15.642μg/ml），0.5%H2SO4溶液处理次之，95%乙醇超声提取小檗碱浓度最低（11.3426μg/ml）。为了考察超声提取的小檗碱结构是否有变化，以常规浸泡法提取小檗碱成分作对照，用红外谱仪扫描，核磁共振波谱仪测得两种提取法所得的小檗碱样品的光谱和氢图谱图一致，说明超声波提取未破坏小檗碱成分的结构［22］。吴宝华［23］报道，黄柏用甲醇煮后用超声波处理提取小檗碱，时间短，产率高。鲁云博等［24］用HClCH3OH(1∶10)溶液超声20min的提取方法，可以获得较高的盐酸小檗碱提取率。岑志芳等［25］采用超声波法考察川黄柏中小檗碱的提出率，优选最佳的超声频率。以饱和的石灰水为溶媒，分别以不同频率的超声波从川黄柏中提取盐酸小檗碱并与浸渍法比较，结果用50kHz超声波提取3次，20min/次，提取率最高，比浸渍高近1倍。
5微波法提取小檗碱
微波指频率在300～300000MHZ之间的电磁波，其提取机制是，一方面通过微波照射，使植物细胞破裂，细胞内的有效成分自由流出转移至温度较低的提取介质中；另一方面，微波产生的电磁场加速被提取组分由物料内部向提取溶剂界面的扩散速率。邓远辉等［26］用微波法提取黄连中的小檗碱，以干固物和小檗碱含量测定值为指标，比较微波和回流两种方法。干固物测定结构显示，在单位时间内微波处理较回流好，具有明显优势；以小檗碱含量为指标，结果显示回流提取小檗碱含量高于微波提取。郭锦棠等［27］用微波索氏联合工艺提取小檗碱。选用不同粒度的黄连药材，精确称量10g，加入一定量的蒸馏水，混合均匀，在变频微波炉中，以不同水平的微波功率，辅助时间进行微波照射，每份样品待其冷却后，重复照射1次。微波预处理后，在索氏提取器中以不同水平的提取溶剂用量与提取时间进行提取，将提取液静置过夜，取上清液加盐酸调pH值为2，然后加入18%的食盐水，将生成的沉淀静置一段时间后过滤，水洗后放入电热鼓风干燥箱，在60～80℃加热干燥，得到盐酸小檗碱粗品，计算收率。通过正交实验优选条件为，微波功率520W，（80%功率档），辐照时间1.5min×2次，基质含水量20ml，粒度为中粒，提取溶剂用量100ml，提取时间4h，重复实验3次，盐酸小檗碱粗品平均收率5.634%。实验表明，微波-索氏联合工艺比单用索氏提取得到的小檗碱收率明显要高，与传统提取方法比，提取效率高，无需过滤，工艺简单。
张海容等［28］用正交法优化微波萃取条件，与传统的酸碱法浸提小檗碱比较研究，确定工艺条件：80℃萃取温度，固液比为1∶15,时间1.5min,传统溶剂法萃取温度70℃，固液比为1∶20,时间24h,与稀硫酸浸泡提取比，微波萃取工艺提取时间大大缩短，产量可提高30%，操作简便，省时节能易于控制。
6酶法提取小檗碱
酶工程技术是近几年来用于重要工业的一项生物工程技术。通过酶反应温和地将植物组织分解，加速有效成分的释放提取，选用相应的酶可将影响液体制剂澄清度的杂质如淀粉、蛋白质、果胶等分解去除，并且针对根中含有脂溶性成分多，通过葡萄糖苷酶或转糖苷酶，使脂溶性成分转化成水溶性糖苷类，酶反应提取温度低，可较大幅度地提高得率。例如，马田田［29］用黄柏提取小檗碱之前用纤维素酶进行预处理，可提高小檗碱收率，与未加酶的提取进行比较，有显著性差异。张福维等［30］报道用纤维素酶预处理黄柏提取盐酸小檗碱，收率比不加酶时高28%，其最佳的实验流程为：10g黄柏加入80mlpH4.5柠檬酸缓冲溶液，50℃恒温6h酶解，过滤，滤液中加入0.3mlH2SO4放置10h过滤，滤液中加入石灰乳调pH8～9，过滤，滤液用盐酸调pH值到1.5，向溶液中加入食盐至8%，放置5h，过滤得盐酸小檗碱粗品。梁柏林，周民杰［31］用正交实验法研究酶法提取小檗碱的最佳工艺条件，确定酶解黄连的最佳工艺条件：温度40℃，时间90min，pH4.0,酶用量30mg/g；酶提取工艺比传统乙醇法提小檗碱产率提高49%。马桔云等［32］选用黄连提取小檗碱研究了加酶组和未加酶组对有效成分小檗碱提取的影响，新工艺比原工艺只是多了一个向其中加入纤维素酶的酶解过程，但这两种工艺提取的小檗碱含量有显著差异，而提取的成分一致，因此，考虑是否将新工艺用于黄连提取的工业化中。
7微量法提取小檗碱
微型化学实验是近年来国内外迅速发展的一种实验新方法，有用量少，经费少，环境污染小，安全性好，时间短等优点。据报道［33］用微量法提取黄柏中的小檗碱与常规化学实验相比，只是产率略低。具体数据见表1。表1常规化学实验与微型化学实验比较（略）
8半仿生提取小檗碱
半仿生提取法，是指从生物药剂学的角度，模仿口服药物及其在胃肠道的转换过程，采用一定pH的酸水和碱水依次连续提取，目的是提取含指标成分高的活性混合物，它与纯化学观点“酸碱法”是等同的，又因为此种提取方法的工艺条件要适应工业化生产的实际，不能完全与人体条件完全相同，仅半仿生而已，故称“半仿生提取技术”。这种提取方法的特点是可以提取和保留更多的有效成分，能缩短生产周期，降低成本。
林慧彬等［34］以小檗碱的含量为指标，采用半仿生提取法，对黄连解毒汤的最佳药材组合方式进行筛选，优化了组合配伍。张学兰等［35］以小檗碱，总生物碱，干浸膏量为指标对黄柏做半仿生提取法和水提取法相比较，结果表明，半仿生提取液明显优于水提取液。
9超临界萃取提取小檗碱
超临界萃取是今年来逐步发展起来的一种现代提取分离技术，主要是利用二氧化碳在超临界温度下具有流体的性质来提取低极性成分，通过加入少量极性稍大的溶剂作为夹带剂，提高溶剂的极性扩大提取成分的极性范围。日本学者系川秀治等［36］早在20世纪80年代就以TLC为指标，用超临界萃取的方法对黄连有效成分进行了提取。齐艳宁［37］也报道，通过实验研究，超临界萃取的方法与传统溶剂的提取方法相比，有效成分高度浓缩，收率高，药理效果好，且毒性降低。
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关键词：挥发油正交实验提取工艺
是菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat的干燥头状花序，是我国常用中药。传统研究认为具有散风清热、平肝明目作用。可用于风热感冒、头痛眩晕、眼目昏花［1］。现代国内外药理研究表明，具有抗肿瘤、消炎、抗菌、抗氧化、增加冠脉流量、抗心肌缺血、抗病毒等多种药理活性［2，3］。其中挥发油是其主要活性成分之一。
目前，挥发油的提取方法有水蒸气蒸馏法、有机溶剂提取法、超临界流体萃取法等［4］。其中有机溶剂法容易引入杂质，造成有机溶剂残留［5］；超临界流体萃取法的成本较高；水蒸气蒸馏法简单，容易操作，是《中国药典》中挥发油含量测定用的方法。但对水蒸气蒸馏提取挥发油的最佳工艺条件的研究尚未见报道。本实验通过改进《中国药典》挥发油提取方法，采用水蒸气蒸馏法，正交设计考察了粉碎度、加水量、浸泡时间和蒸馏时间对挥发油提取率的影响，确定了水蒸气蒸馏法提取挥发油的最佳工艺。
1材料与仪器
1.1材料
干燥（购于江苏省射阳县洋马基地），为菊属植物杭白菊的干燥花蕾；氯化钠，无水硫酸钠，正己烷均为分析纯。
1.2仪器
挥发油提取器（南京金正玻璃仪器厂）；万能粉碎机；电子分析天平；标准筛（浙江上虞市道墟张兴沙筛厂）；调温试电热套（通州市申通电热器厂）；水浴锅。
2方法与结果
2.1挥发油的提取取一定粉碎度的50g，精密称定，置2000ml圆底烧瓶中，参照《中国药典》Ⅰ部附录XD［1］并作改进，加一定量饱和氯化钠溶液与数粒玻璃珠，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再从冷凝管上端加入2ml正己烷，然后将烧瓶置电热套中加热至沸，调温并保持微沸一定时间，停止加热，放置片刻，开启测定器下端活塞将水缓缓放出，收集挥发油，无水硫酸钠脱水，50℃水浴3h挥去正己烷，得到淡黄色挥发油，精密称重，计算提取率。
挥发油提取率（%）=中挥发油含量/重量×100%
2.2不同浸泡液对挥发油得油量的影响称取粉碎50g，加入500ml饱和氯化钠/蒸馏水，在浸泡2h、蒸馏5h下进行提取，实验重复3次，对比两条件下的提取率（见表1）。结果表明，使用饱和氯化钠可以提高提取率，这可能与加NaCl溶液促进油水分离、减少挥发油在水中的溶解度有关［6］，所以在正交实验中采取用饱和氯化钠溶液浸泡。表1不同浸泡液对挥发油得油量的影响（略）
2.3挥发油提取的单因素实验前期预实验研究发现，挥发油得率与其粉碎度、加水量、浸泡时间、蒸馏时间有关系，因此首先通过单因素实验考察提取挥发油的工艺条件。
2.3.1粉碎度对挥发油提取率的影响按照“2.1”项方法，设粉碎度为整棵、剪段、20～40目、40～60目、60～80目、80～100目、100目以上，10倍加水量，2h浸泡时间，5h蒸馏时间下进行水蒸气蒸馏提取，称量并计算提取率。结果见图1。
根据扩散定律：药材粉碎度愈细，浸出效果愈好，成分得率愈高［7］。在图1中发现：挥发油提取率随着粉碎度的增加而增大，但粉碎度达到100目以上时，容易糊化并产生很多泡沫，溶液易暴沸，导致挥发油溢出，以致收集量很少，究其原因为粉碎越细，挥发油含量越低［8］。过细的粉末加水加热时成糊状，容易引起焦化和暴沸现象，故实验选择80～100目的粉碎度作为最佳粉碎度。
2.3.2加水量对挥发油提取率的影响按照“2.1”项方法，设加水量为8，10，12，14，16，18，20倍，粉碎度为粉碎的混合颗粒，浸泡2h，蒸馏5h下进行水蒸气蒸馏，称重并计算提取率。结果见图2。
由图2可知，加水量在14倍时挥发油的提取率为最高，可以认为加水量过多导致溶液易暴沸，影响提取效果，导致挥发油溢出，水量过少又不能充分浸润，故选择14倍为最佳加水量。
2.3.3浸泡时间对挥发油提取率的影响按照“2.1”项方法，设浸泡时间为0,2，4，6，8，10，12h，粉碎度为粉碎的混合颗粒，10倍加水量，蒸馏5h下进行水蒸气蒸馏，称重并计算提取率。结果见图3。
由图3实验结果可知，挥发油提取率随着浸泡时间的延长而增大，在10h达到最大值并保持至24h，浸泡理论认为浸泡可使植物细胞间隙变大，组织细胞充分膨胀，加速细胞内、外液动态交换而有利于挥发油的提取［9］。因此，可以认为浸泡10h组织已经充分膨胀，本着工业生产节约时间原则，浸泡时间选择10h为最佳提取时间。
2.3.4蒸馏时间对挥发油提取率的影响按“2.1”项方法，设蒸馏时间为3.5，5，7，9，10，11，13，15h，粉碎度为粉碎的混合颗粒，10倍加水量，2h浸泡时间下进行水蒸气蒸馏，称重并计算提取率。结果见图4。
观察图4提取过程可以看出，蒸馏13h前挥发油蒸馏出的比较多，后来随着蒸馏的继续，蒸馏出来的挥发油量增加缓慢。这是由于随时间推移，料液中油类组分减少，因此挥发油蒸馏出的量减少。从图4中可以看出，在蒸馏13h达到最大值并保持至15h，故选择13h为最佳蒸馏时间。
2.4提取工艺参数的优化-正交实验
2.4.1正交实验设计根据单因素结果，以挥发油提取率为评定指标，选择粉碎度（A）、浸泡时间(B)、加水量(C)和蒸馏时间(D)为考察因素，每个因素3个水平，选用L9（34）正交表，实验安排见表2。表2挥发油提取工艺因素水平（略）
2.4.2正交实验结果按照表2正交实验设计，如“2.1”项方法进行实验，计算提取率，结果见表3～4。
表3正交实验结果（略）表4方差分析表（略）
由表3中极差直观分析，各因素作用主次顺序为A>D>C>B,表4方差分析结果表明：A，D因素的影响具有非常显著性意义(P<0.01)，B，C因素具有显著性（P<0.05），最优水平为A3B3C3D3，即粉碎度80～100目，蒸馏时间13h，加水量14倍，浸泡时间10h。此结果与单因素实验结果一致。
2.5验证实验为进一步验证正交实验结果的可靠性与重现性，按最佳工艺条件如“2.1”项方法进行3次平行实验，挥发油得量分别为0.279，0.274，0.272g，挥发油平均得量为0.275g，在该条件下挥发油提取率为0.55%。
3讨论
饱和氯化钠和蒸馏水作为浸泡液体的对比实验认为饱和氯化钠对挥发油在水中溶解度有降低作用，但在单因素试验中，考虑节约生产成本，浸泡时未加入饱和氯化钠，仅仅加了蒸馏水，故提取率小于正交试验中的组合提取率。
本次实验所用产自江苏省射阳县洋马基地的杭白菊，在实验中蒸馏出的挥发油油滴散布在水中，有些密度大的成分甚至降至挥发油提取器的刻度下端，导致无法聚集，故实验中采取加入少量正己烷的方法以促进挥发油的聚集。
实验过程中发现粉碎的质轻，漂于水面上不易浸透，因此加入饱和氯化钠浸泡时应注意搅拌，使浸泡时能够充分浸润。
通过正交实验和验证实验表明挥发油的提取工艺是科学的、可行的，影响挥发油提取的主要因素为粉碎度，其次是蒸馏时间、加水量、浸泡时间。最佳提取工艺条件为A3B3C3D3，即粉碎度80～100目，浸泡时间10h，加水量14倍，蒸馏时间13h。在此工艺条件下挥发油提取率为0.55%，与按照《中国药典》方法提取杭白菊挥发油的提取率0.1632%［10］、0.300%［11］相比，提取率有所上升。此最佳工艺条件简单安全，不污染环境，适用于工业生产。
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1.1仪器Agilent1100Series高效液相色谱仪（安捷伦公司）；SartoriusBP211-D电子天平（德国赛多利斯公司）。
1.2试药
麻黄、芍药、细辛、干姜、甘草、桂枝、半夏和五味子药材（均购于成都市荷花池中药材市场）；磷酸二氢钾、磷酸；甲醇和乙腈为色谱纯。
2方法［2，3］
2.1指标及含量测定方法《中国药典》2005版收载的小青龙汤现有制剂均只以方中的芍药苷为质量控制指标，因此本方保留该质量控制指标。复方中麻黄为君药，因此增加盐酸麻黄碱为质量控制指标。
2.1.1盐酸麻黄碱含量测定方法盐酸麻黄碱对照品溶液的制备：精密称取盐酸麻黄碱对照品10.83mg于100ml容量瓶中，以甲醇定容，摇匀，精密吸取2ml于25ml量瓶中，甲醇定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液备用。
麻黄供试品的制备：精密量取复方提取液适量（相当于麻黄生药0.2g）于已干燥的锥形瓶中，低温挥干，以25ml甲醇溶解，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，以甲醇补足减少量，摇匀，滤过，精密量取续液1ml，置中性氧化铝柱（100～200目，内径1cm，1.5g）上，以50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9ml于量瓶中，加磷酸1滴，以50%甲醇定容摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液备用。
测定方法：C18柱（250mm×4.6mmDiamonsil5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸（9∶90），以三乙胺调节pH=4.5，检测波长207nm，流速1ml/min，柱温25℃，理论板数以盐酸麻黄碱峰计，不得低于3000。
盐酸麻黄碱标准曲线的绘制：分别吸取盐酸麻黄碱对照品溶液2，4，6，8，10，12，16，20，24μl进样，按照测定方法测定，绘制标准曲线。结果见图1。回归曲线Y=1722.7X+39.103，R2=0.9998，盐酸麻黄碱进样量在0.017288～0.207456μg间具有良好的线性关系。
2.1.2芍药苷含量测定方法
芍药苷对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加入量瓶中，甲醇定容，制成60μg/ml的甲醇对照品溶液，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液备用。
白芍供试品溶液的制备：精密量取复方提取液适量（相当于白芍生药0.1g），水浴挥干，以35ml稀乙醇转移至50ml量瓶中，超声处理30min，冷却至室温，稀乙醇定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液备用。
测定方法：C18柱（250mm×4.6mm,Diamonsil5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸（14∶86），检测波长230nm，流速1ml/min，柱温25℃，理论板数以芍药苷峰计，不得低于2000。
芍药苷标准曲线的绘制：分别吸取芍药苷对照品溶液1，2，3，4，6，8μl进样，按照测定方法测定，绘制标准曲线，（见图2）。回归曲线Y=15414X+2.5391，R2=0.9998，芍药苷进样量在0.006～0.048μg间具有良好的线性关系。
2.26种提取工艺的优化研究及结果
2.2.1不同提取溶剂回流提取工艺研究及结果以水、60%乙醇、95%乙醇为提取溶剂，按L9（34）正交表进行实验。因素水平安排按照表1执行，实验按各正交表实施，结果用SPSS11.5作方差分析，确定优化工艺。结果见表2～7。表1不同溶液回流提取工艺因素水平（略）表2以水为溶剂回流提取考察结果（略）表3以水为溶剂回流提取方差分析结果（略）表4以60%乙醇为溶剂回流提取考察结果（略）表5以60%乙醇溶剂回流提取方差分析结果（略）表6以95%乙醇为溶剂回流提取考察结果（略）表7以95%乙醇为溶剂回流提取方差分析结果（略）
由方差分析结果分析得，影响因素大小为：提取次数（C）＞提取溶剂量（A）＞提取时间（B），3个因素均具有显著性影响，优化工艺为A2B2C3。
由方差分析结果得，影响因素大小为：提取时间（B）＞提取溶剂量（A）＞提取次数（C），3个因素均具有显著性影响，优化工艺为A3B2C2。
由方差分析结果分析得，影响因素大小为：提取次数（C）＞提取溶剂量（A）＞提取时间（B），3个因素均具有显著性影响，优化工艺为A3B2C3。
2.2.2不同提取溶剂渗漉提取工艺研究及结果以水、60%乙醇、95%乙醇为提取溶剂，按L9（34）正交表进行实验。因素水平安排按照表8执行，实验按各正交表实施，结果用SPSS11.5作方差分析，确定优化工艺。结果见表9～14。表8不同溶剂渗漉提取工艺因素水平（略）表9以水为溶剂渗漉提取考察结果（略）表10以水为溶剂渗漉提取方差分析结果（略）表11以60%乙醇为溶剂渗漉提取考察结果（略）表12以60%乙醇溶剂渗漉提取方差分析结果（略）表13以95%乙醇为溶剂渗漉提取考察结果（略）表14以95%乙醇为溶剂渗漉提取方差分析结果（略）
由方差分析结果分析得，影响因素大小为：渗漉液量（A）＞渗液速度（C）＞药材粒度（B），A和C因素具有显著性影响，优化工艺为A3B2C3。
由方差分析结果得，影响因素大小为：药材粒度（B）＞渗漉液量（A）＞渗漉速度（C），B因素具有显著性影响，优化工艺为A1B3C1。
由方差分析结果分析得，影响因素大小为：渗漉液量（A）＞药材粒度（B）＞渗漉速度（C），A因素具有显著性影响，优化工艺为A2B2C1。
2.3不同提取工艺及提取溶剂对提取工艺的影响对比研究
2.3.1不同正交实验因素分析结果见表15。表15不同正交实验结果分析（略）
2.3.2不同优化提取工艺的对比研究按照上述各种优化工艺，分别称取复方药材进行提取试验，以提取液中盐酸麻黄碱和芍药苷的含量为指标加权（权重系数依次为0.6和0.4），综合评价提取工艺。对比不同提取工艺的差异。结果见表16。表16不同工艺验证结果(略)
2.3.3相同方法不同溶剂对提取工艺的影响研究结果见表17。表17不同溶剂时间的比较结果（略）
2.3.4相同溶剂不同提取方法间的比较研究结果见表18。表18不同提取方法比较结果（略）
2.3.5综合评价结果实验表明，在考察范围内，小青龙汤提取工艺优劣顺序为60%乙醇回流提取＞水回流提取＞60%乙醇渗漉＞95%乙醇回流提取＞水渗漉；提取方法对比研究结果表明，回流提取方法效果较渗漉提取方法效果好；提取溶剂对比研究表明60%乙醇为提取溶剂较其他两种溶剂效果好。
3讨论
现有小青龙汤成方制剂只选择了芍药苷为含量控制指标，对于复方制剂的多指标多成分而言，显得质量控制过于单一。本研究从处方构成出发，增加君药麻黄的指标成分盐酸麻黄碱为指标，更多的注重全方的系统性。
实验结果均反应回流提取法较渗漉法的提取效果好，其中提取溶剂又以60%乙醇为佳，这与控制指标的选择有一定的关系，但是是否在药效方面有正变的关系，还需要进行药效学研究。
小青龙汤整体提取的不同工艺比较结果得出，优化提取工艺为12倍量60%乙醇回流提取2次，1.5h/次。所得优化提取工艺合理可行，可作为小青龙汤的提取工艺。
【参考文献】
［1］段富津.方剂学［M］.上海：上海科学技术出版社，2002：25.
［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005.
［3］马云淑，宁朝香.小青龙滴丸的制备工艺及质量标准［J］.云南中医学院学报，1999，22（3）：14.
关键词：加工贸易；技术溢出效应；自主创新
珠三角地区既是我国加工贸易的最早起源地，也是我国加工贸易发展最为成熟的地区。外商投资的加工贸易不仅是珠三角经济发展的主要推动力，而且在广东省对外贸易中占主导地位。我国发展加工贸易的主要目的之一，就是希望外资进入能带来先进技术，产生技术外溢，进而带动我国产业的技术进步。珠三角地区加工贸易的技术溢出效应是低还是高，带来的技术溢出效应到底有多大，能在多大程度上推动珠三角地区的产业升级，已成为人们讨论的热点话题。
一、珠三角地区加工贸易技术溢出的特点
珠三角加工贸易的技术溢出具有明显的阶段性特征，大体经历三个阶段：
(一)1978～1990年是加工贸易技术溢出的起步阶段。这一阶段主要采取“三来一补”(来料加工、来件装配、来样加工、补偿贸易)的模式。早在召开前的1978年8月底，东莞市虎门镇就正式成立了中国内地第一家“三来一补”企业，编号为“粤字001”。尽管这家企业的规模不大，设备较落后，产品档次也不高，但在春潮萌动的中国内地却抢吃了第一只“螃蟹”，从此揭开了珠三角直接利用外资的序幕。在改革开放之初，珠三角地区一无资金，二无技术，三无管理经验和国外销售渠道，但珠三角也有自身的优势，劳动力丰富而且便宜，土地资源多而且价格低。不仅如此，改革开放之时正是香港产业升级换代之日，香港商人受厂租、劳动力价格居高不下的困扰，急于把劳动密集型产业迁出香港，转移到生产成本相对较低的地方。珠三角以其独特的地理位置、人文优势以及生产成本优势，成为港商的首选地区。珠三角人则因势利导，以乡镇企业为依托，以“三来一补”为突破口，积极发展加工贸易。
(二)1991～2000年是加工贸易技术溢出的发展阶段。主要表现为高新技术产业逐渐成为珠三角经济发展的第一增长点。计算机及软件、通讯、微电子及基础元器件、新一代视听产品、机电一体化、重点轻工和家电等七大主导产业快速发展，技术密集型和资金密集型行业和产品逐步提高。一大批国际知名跨国公司来珠三角兴建高新技术企业，世界500强IBM、飞利浦、杜邦、惠普、三星、施乐、康柏等跨国公司相继在珠三角设立独资或合资企业，同时带来了先进的技术。在珠三角加工贸易技术溢出的发展阶段，珠三角人从实践中逐步意识到“三来一补”的局限性和科学技术的重要性，但由于历史条件的限制，当时人们主要还是关注提升外资加工贸易的技术水平。采取的措施是在淘汰低档次、技术落后、低附加值、高能耗、高污染的“三来一补”企业的同时，有选择地引进了一大批高科技的加工贸易企业。珠三角在提升外资加工贸易科技含量的过程中，自然也带来了技术的溢出效应。主要体现在：第一，加工贸易产品的技术含量高。产品的技术含量高对珠三角地区的同行有很强的竞争作用和示范作用，本地企业通过学习和模仿产生了大量的技术溢出效应。第二，加工贸易与本地产业有密切的关联程度。这一时期，加工贸易的生产料件已经完全改变了全部依靠进口的格局。第三，加工贸易企业普遍重视管理人员、科技人员的培训。在加工贸易企业中，外商出于劳动力成本及其它因素的考虑，往往选择和招聘当地的优秀人才加以培训和管理，为当地培养了一大批懂技术、会管理、熟悉国内外市场的人才。经过技术培训的技术工人和管理人员一旦由外资加工贸易企业流向其他企业或自创企业时，所学的各种技术也随之外流，从而引起溢出。
(三)2001年至今是加工贸易技术溢出的飞跃阶段。珠三角加工贸易技术溢出第三阶段的最大特点是不少跨国公司的研发中心落户珠三角，并且跨国公司本土化的趋势初见端倪。随着国际产业转移的深化，跨国公司纷纷在珠三角设立研发机构。截至2005年底，杜邦、本田、日立、三星等知名跨国公司在珠三角就已设立了研发机构243家。这些研发中心上接研发源头，下连规模生产企业和市场，为珠三角吸收和承接国外高水平技术，增强科技创新能力提供了良好的研发平台。在珠三角加工贸易技术溢出的飞跃阶段，技术溢出效应有实质性的突破。主要表现在：大规模引进成套设备逐步被引进关键技术、关键设备所替代。越来越多的跨国公司为了能进入珠三角市场，竞相以各种方式向珠三角输出技术，技术引进的结构在不断优化。随着珠三角企业技术引进水平的不断提高，引进的目的逐步从单一生产技术的引进转向以提高产品附加值、增强创新能力的技术引进，引进技术方式多元化。跨国公司向珠三角输出技术，除了有技术许可、技术服务、入股投资等传统方式之外，还有相互交换技术使用权、特许专营等新形式，加工贸易企业的高级管理人员和技术人员本地化。重用本地管理和技术的精英使不少跨国公司在中国市场的业绩明显上升，促使跨国公司向人才本地化转变。
二、珠三角地区加工贸易技术溢出的主要路径
(一)技术模仿的路径。技术可以通过模仿和示范产生溢出效应。珠三角生产规模较大的本地企业，相当一部分是在加工贸易的技术、管理等方面示范效应下，通过学习、模仿和竞争，逐渐发展壮大，甚至超过了竞争对手。美的、科龙、格力就是在西方跨国公司的巨大压力下，跟踪跨国公司的技术，经过模仿和创新，不断提高家电业技术水平的典型代表。
(二)配套生产的路径。发展珠三角配套产业是珠三角外向型经济实现技术外溢的直接渠道。在珠三角地区，加工贸易企业的生产料件已经完全改变了改革开放初期全部依靠进口的格局，产品本地化水平逐步提高。以电子信息产品为例，珠三角已集聚了5万多家电子信息企业，打印机配套率达91％、PC机达80％、激光视盘机达64％，稳压电源达53％、计算机主板及功能板达41％。珠江三角洲已成为世界级的IT业制造基地。不少与外资加工贸易企业合作、为外资厂提供配套加工零配件的本地企业，在加工配套过程中逐步积累了原始资本和掌握了生产技术以及市场营销网络，由“配角”地位逐步转化为市场的“主角”。
(三)人才流动的路径。在通常情况下，加工贸易企业的技术与管理人员当地化比例越高，流动性越强，向内资企业流动越多，技术外溢效果越好。掌握技术的人员的流动可以产生技术溢出效应。这是珠三角取得技术溢出效应的重要形式。珠三角加工贸易企业聘用了当地大量的管理人员、技术人员以及普通的员工，实际上就是间接地向珠三角提供技术转移。在珠江三角洲地区，有不少人在加工贸易企业积累了先进技术、管理经验和市场资源，成为自身创业的重要资本。昨天的“打工仔”，今天成为大大小小的“老板”，在珠三角地区是一种较为普遍的现象。
三、珠三角地区提升加工贸易技术溢出的启示
(一)技术的消化吸收和模仿创新是自主创新和产业升级的核心。珠三角地区的经验表明，技术的消化吸收和模仿创新是后进地区发挥后发优势、实现经济和技术赶超的关键所在。没有对转移技术的消化吸收和在此基础上的模仿创新，该地区的发展和产业升级换代的目标就难以实现。如果加工贸易带来的技术溢出长期停留在低技术、低层次的水平上，只会强化经济发展对外来资本的依赖性，这样虽然可以使某一地区的经济出现暂时的繁荣，但有可能由于生产成本上升，加工贸易企业人走楼空，最终导致经济出现“空心化”的现象。
(二)缩小与发达国家技术差距的根本途径是本土企业的自主研发。跨国公司转移技术的主要目的，是在保持技术垄断的前提下，获得技术创新的利润最大化。以技术垄断为前提，跨国公司进行的技术转移都是成熟性技术。不论处在全球化生产链条的哪个环节，从事加工贸易的东道国企业都不可能获得最先进的技术转移和技术溢出，依靠技术转移和技术溢出也就不可能实现产业技术的赶超。即使位于核心的产业链条，依靠核心技术的转移与溢出也是十分有限的。进入21世纪，珠三角人发现，外资加工贸易企业可以向国内转移一般性的先进技术，但真正核心、领先的技术是绝对不可能转移的。利用加工贸易的技术溢出是一个地区产业技术升级的一种办法，但真正缩小与发达国家的技术差距，最终还得靠本土企业的自主研发。
(三)开展深加工结转是实现技术溢出的有效方式。深加工结转是指加工贸易企业将保税进口料件加工的产品结转至下一家加工贸易企业深加工后复出口的经营活动。据统计，目前珠三角七成加工贸易企业采购配套以深加工结转的方式实现。在全省IT、计算机和家电行业中，80％以上的手机部件、90％以上的计算机零部件和100％的彩电部件都可以在珠三角地区内实现配套。
(四)产业集群的形成是技术溢出的有效载体。仅仅在加工装配环节取得成功是远远不够的，必须通过向上下游环节延伸，并获得更多的技术转移和后向联系，才能获得更多的技术溢出和加工贸易利益，否则，劳动力成本上升之时就是加工贸易利益丧失之日。加工装配产业是无根工业，即本地劳动力成本上升之日，就是加工装配产业转移之时。如果不能在加工装配活动中获得技术溢出，不能培养出具有相当素养的产业大军，现时加工装配活动中所得收益将会随着加工贸易产业向外转移在瞬间化为乌有。如果该地区形成了产业集群，即使加工贸易企业由于劳动力成本上升而向外转移，本地仍可通过向增加值相对较高的前向或后向生产环节转移，实现产品结构和产业结构的双重升级，继续分享加工贸易利益。
[关键词]县级工业园区，发展现状，存在问题，对策
中图分类号：F427 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2017）02-0260-01
在工业园区的建设中，应该充分利用好相关的新技术、新思想，能不断推动县域经济的快速发展，保证顺利完成农村经济发展的转型。尽管当前我国的工业园区发展取得一定进步，但在很多方面还存在不足之处[1，2]，应该结合当前县级工业园区的发展现状，不断总结和分析，找出不足之处，重点探讨县级工业园区建设中的关键问题，并以此提出相应的对策。
1 A县级工业园区的发展现状
此县级工业园经过六年的发展，已经逐步建立起标准化的工业厂房，面积达到380万m2，硬化道路能够实现20km，排水管道铺设长达24km，整体具有较好的绿化面积，当前入住的项目已经达到100个左右，到位资金高达14万亿元，成功将解决了将近一万人的就业问题。随着不断的发展，该工业园在很多方面的产业已经初具规模，尽管发展速度相当快，但在质量方面还存在很大的欠缺之处，发展中面临着不少的困难。
2 县级工业园区发展中面临的问题分析与思考
2.1 自主发展能力欠缺
在工业园区的发展中，从政府层面来看，应该给予一定的支持和帮助，政府的扶持则对于工业园区的发展必不可少。其招商引资也大都是属于政府行为的帮助，由此可见，在工业园区的发展过程中，政府则是起到了主导作用，另外，当地政府的考核指标之一也是工业园区的经营情况。在这样的背景下，工业园区往往仅重视引资的总量、规模等指标，并没有从企业内部发展的角度进行过多的考虑，导致企业的创新能力以及可持续发展能力大大下降，这样就只会单纯地依靠政府，而没有较强的自主发展能力。
2.2 招商引资的难度大
从该工业全区的地理位置等客观条件考虑，由于受到人才、交通等因素的影响，具有一定的招商引资难度。当前，从工业园区的地理位置考虑，并没有高速公路、高铁等直接相连，这样就会造成投资者对于该园区的信心有所下降。另外，考虑到工业园区的发展历史，并没有将最新的营销手段应用于其中，并没有开展基于互联网的微信、微博等营销手段，招商项目并没有经过必要的包装和加工，这样就会造成入园企业数量有限。
2.3 融资途径较少
可以看出，当前的工业园发展模式还维持在初步发展阶段，要想保证后续的稳定可持续化发展，就应该具备雄厚的资金实力，当前的园区资金来源仅依靠政府的财政拨款，还包括部分土地出让金以及贷款。在这样的背景下，大部分有依赖于政府，而进行真正意义上的商业化开发比例还比较低，并没有从融资角度形成比较好的良性循环阶段[3]。
2.4 产业集聚度比较低
从该县的经济发展水平来看，相应涉及到的a业发展基础还不雄厚，从园区产业结构来分析，大多还属于劳动密集型企业，具备比较低的技术含量，这样就是所谓的处于产业层次低的问题[4]。由于发展时间有限，并没有具备龙头企业，相互之间也没有形成较强的企业关联度，也就是具备比较低的产业集聚度。
3 县级工业园区发展的对策和建议
3.1 进一步让工业园区的定位更加明确
从无数的成功案例中可以看出，要想保证园区建设获得成功，就应该做好先行规划工作，这样才能进一步推动工业园区的健康发展。在此过程中，首先应该保障园区功能进一步确定，实现园区的健康稳定发展。根据相应的发展规划目标的要求，秉承科学规划、合理设计的原则，结合当地的特点和优势，应该保证能够使得产业特点愈加明显，保证园区的功能区、工业区更加合理和使用。另外，还应该积极采用分类指导的思想，不断通过积累营造具有鲜明特色的主导产业，保证形成蓬勃发展的特色园区。
3.2 全力推进工业园区一体化建设
应该从县域经济的实际情况出发，不断努力做好工业园区的一体化建设工作，能够集中做好服务、生活以及生产的各方面工作，体现出整体性一体化特点，具体来说，应该包括以下几个方面的内容：一是，应该保障园区服务配套体系进一步完善，能够履行好管委会在其中的责任，进一步明确其在行政、经济、社会发展中的作用，能够积极联系相关部门，做好园区的服务管理工作，做好自身的定位，努力为企业发展提供更为优质的服务，切实履行好自身的责任；二是，应该保障基础设施建设的进一步加强，应该从园区的实际需求出发，积极开展配套设施的建设，比如，员工公寓、学校培训、文化娱乐场所等；三是，应该保证中介机构的进一步完善，充分发挥他们的服务性作用，做好扶植中小型企业的作用，为新入园的企业提供全方位的服务，有效处理企业中各种风险因素，快速发挥企业自身的竞争力，保障企业的长期稳定发展。
3.3 优化园区的产业优化升级
针对工业园区的发展来说，应该重视招商工作的重要性，不断完善招商工作，创新招商模式，为工业园区的发展提供新鲜的血液。另外，结合当前工业园区的产业层次发展中存在的问题，应该解放思想，多在科技型、服务型企业中考虑，不断利用信息化科技发展来进行产业转型升级，这样才能吸引更多的优质企业。利用不断延伸的产业链，利用企业集聚效益，进一步提升企业的经营规模，鼓励进行品牌战略，不断提升企业的知名度，打造极富特色的产业链。
3.4 创新园区的融资机制
当前，工业园缺乏资金，表现在在处理燃气、供水、污水等方面存在很大问题，如果不能够摆脱传统的模式，单纯依靠政府的自助，这样就会形成越来越大的资金缺口问题，同时，不能形成统一化标准的工业厂房建设，在此背景下，就造成了用地集约化程度较低。应该进一步创新投融资模式，积极参考“共同建设，经营开发”的方案。在有条件的基础上，可以选择专业化的管理团队，能够将先进的理念融入园区管理中，建立工业园区开发公司，积极将政府和市场资源开展整合，保证相应优势得到发挥，进一步提升园区的开发建设。
4 结束语
当前，随着我国经济的快速发展，带动着县域经济也呈现出如火如荼的发展态势，对于我国的整体经济发展具有重要的意义。在开展县级工业园区的建设中，存在着很多挑战和机遇，在这个经济转型期，县级工业园区的建设应该解放思想，不断创新，努力从自身实际出发，克服建设中存在的经济发展模式、融资困难等方面的问题。在这样的背景下，通过本文的论述，希望对于今后我国的县级工业园区发展建设具有一定帮助。
参考文献
[1] 杨永星.西部地区县级工业园区发展的困境与出路分析--以遵义余庆县为例[J].才智，2013，（26）.
[2] 袁四牯.县级工业园区建设中面临的主要问题及对策[J].农村财政与财务，2008（11）.
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