时间:2023-03-01 16:26:21
绪论:在寻找写作灵感吗?爱发表网为您精选了8篇制作邀请函,愿这些内容能够启迪您的思维,激发您的创作热情,欢迎您的阅读与分享!
I'm Li Hua,the leader of the paper-cutting club in our school.l remember you were interested in Chinese traditional culture.now I'm glad to tell you there will be a Chinese paper-cutting exhibition which is held by our school.This is a good chance to have a full understanding about Chinese traditional culture.l really hope you can leave some time for the art feast.
The exhibition will take place in our school hall from 2 to 5 in the afternoon on June 21st. And the theme of the exhibition is "beauty of china".Not only our club 's works will be displayed,but also will we have a valuable set of paper-cutting which is created by a famous artist of this field.what's more,there will be a lot of interesting activities,from which you can know more about Chinese culture.
I would appreciate it if you could accept my invitation.l'm sure this exhibiting will leave you a wonderful impression!Looking forward to your reply.
Beat wishes!
摘 要:目的:探讨中药复方大补阴汤含药血清对人非小细胞性肺癌H460细胞的生长抑制作用。方法:将小鼠随机分为正常组、生理盐水组和大补阴汤组,连续灌胃给药7天后,眼眶取血,分离血清;生物倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测大补阴汤含药血清对人非小细胞性肺癌H460细胞的生长抑制作用。结果:大补阴汤作用H460细胞48h和72h以后,可见部分细胞变圆,体积变小,有凋亡小体产生。大补阴汤可时间依赖性抑制H460细胞的生长。结论:中药复方大补阴汤含药血清可以抑制H460细胞的增殖,为进一步探讨其抗肿瘤作用机制提供实验依据。
关键词:大补阴汤;血清药理;H460细胞
大补阴汤为补益类中药复方,该方出自《丹溪心法》,是滋阴降火的代表方剂。全方由熟地黄、龟板、知母、黄柏和猪脊髓组成。临床常用于相应的气虚阴虚病证,体内用药多起到满意的疗效。近年来的临床实验研究发现。其对慢性再生障碍性贫血、顽固性失眠、出血性疾病及恶性肿瘤等疾病具有较好的治疗作用。本实验引入血清药理学方法(即体内实验和体外实验结合的一种方法),用服药后的小鼠血清(含药血清)代替中药煎剂作用于体外细胞,研究中药复方大补阴汤含药血清对人非小细胞性肺癌H460细胞的生长抑制作用。
1 实验材料
1.1 药品与仅器二氧化碳培养箱(HH・CP-1,上海),生物倒置显微镜(AE20,Mode),96孔培养板(Nune,Roskil-如,Denmark),胎牛血清(天津灏阳生物试剂公司),RPMI一1640培养基(GIBCO),甲基噻唑蓝(MTT),二甲基亚砜(DMSO)。熟地黄、龟板、知母、黄柏(购自辽宁中医药大学附属医院药局),猪脊髓(购自家乐福超市)。
1.2 实验动物昆明种小鼠30只(辽宁中医药大学实验动物中心提供),雌雄各半,体重18-22g。
2 方法
2.1 细胞培养人非小细胞性肺癌H460细胞株(Ameri-can Type Culture Collection),细胞单层接种在含5%胎牛血清,2%谷氨酰胺,RPMI-1640培养液中,在温度为37℃,C02浓度为5%的培养箱中培养。
2.2 中药复方液的制备大补阴汤(熟地黄15g,龟板15g,黄柏9g,知母各9g,猪脊髓),上述中药复方药物成分,加水煎煮两遍,合并两次滤液,浓缩至每毫升含原中药复方成分生药1g。置4℃冰箱保存储备。
2.3含药血清的制备昆明种小鼠30只,雌雄各半,体重18~22g。共分为3组,每组10只,雌雄各半,即空白组、盐水组和大补阴汤组。连续7天灌胃给药,每日1次,每次每只0.4mL/10g。上述连续灌胃7天的小鼠,于眼眶取血,静置后离心分离血清10min(2000r/min),56℃水浴灭活30min,经0.221xm微孔滤器过滤除菌(按1:9的比例将培养液加入原血清中)后,冻存备用。
2.4 细胞生长抑制实验取处于对数生长期的H460细胞,调整细胞密度为5×104/mL,以每孔100μL接种于96孔板。置于5%CO2、37℃的培养箱中培养24h后,吸出培养液,分别加入培养液、盐水、大补阴汤的含药血清液,每组重复3个孔。之后继续置于5%C02、37℃的培养箱中培养,加药作用12、24、36和48h后,每孔加入10μL MTT(5g/L),继续培养4h后,弃上清,每孔加入100μL DMSO溶解,酶标仪492nm检测,绘制时效曲线。
抑制率(%)=[A492(阴性对照)-A492(大补阴汤)]/A492(阴性对照)×100%
2.5 细胞形态学变化每瓶1×106个细胞的密度接种于50mL细胞培养瓶中,培养24h后加入大补阴汤含药血清,分别于作用0、12、24、36和48h后用生物倒置显微镜观察。
3 结果
3.1 大补阴汤对H460细胞的生长抑制作用 大补阴汤于不同时间作用于H460细胞后,盐水组细胞的存活率随时间的增加而增加,而大补阴汤组细胞的存活率随时间的增加而减少。可见大补阴汤含药血清对H460细胞具有细胞毒作用并呈明显的时间依赖性。
3.2 细胞凋亡形态学观察光学显微镜观察,与正常对照组细胞相比,大补阴汤作用于H460细胞48h后,部分细胞变圆,体积变小,少量细胞表面发芽,细胞变成不规则状,芽脱落后形成凋亡小体,凋亡小体呈圆形或椭圆形,在凋亡小体内可见高度浓缩的染色质轮廓,作用72h后,可观察到凋亡的H460细胞数量增多,少部分细胞脱落,漂浮于培养液中,亦有少数细胞体积增大,细胞肿胀、破裂,呈坏死状。
4 讨论
关键词:炙甘草汤;含药血清;膀胱平滑肌
中图分类号:R2855文献标志码:A文章编号:1007-2349(2017)05-0021-05
[WT5HZ][JZ]Effect of Zhigancao Decoction Containing Serum on Rabbit’s Isolated Vascular Smooth Muscle
[WT5BZ][JZ]HAI Qing-shan, YANG Yu-qing, MENG Zo-ran, RU Jing, JIN Ya-ju
[WT5"BX][JZ](1. School of Basic Medical Sciences, Yunnan University of Traditional Chinese Medicine, Kunming 650500, Yunnan; [JZ]2. School of Acupuncture and Massage Rehabilitation, Yunnan University of Traditional Chinese Medicine, Kunming 650500, Yunnan)
[WT5HZ]【Abstract】[WTBZ]Objective: To observe the effect of Zhigancao Decoction containing serum on the movement of bladder smooth muscle in normal rabbits and to explore its mechanism. Methods: The activity of bladder smooth muscle in rabbits was recorded by using Powerlab biological signal system. The effects of different concentrations of Zhigancao Decoction on contraction intensity, the contraction frequency and activity of bladder smooth muscle were observed. Results: Compared with the blank control group, the blank serum group and groups of different concentration of Zhigancao Decoction containing serum could increase the contraction intensity of the bladder smooth muscle (the low concentration serum group, P
42炙甘草汤含药血清对兔膀胱平滑肌收缩频率的作用如图2所示,与空白对照组比较,仅低浓度炙甘草汤含药血清组有明显的增加膀胱平滑肌收缩频率的作用。在低浓度含药血清作用的基础上,分别用维拉帕米、阿托品和普萘洛尔阻断钙通道、M和β受体。结果显示,阿托品则对膀胱平滑肌的收缩频率具有降低的效果,说明炙甘草汤含药血清增加膀胱平滑肌频率的作用与M受体有关。M毒蕈碱型受体广泛的存在与平滑肌中,M受体兴奋时可引起平滑肌收缩频率增加。但排除空白血清自身的作用后,低浓度含药血清组增加膀胱平滑肌收缩频率的作用就不具有统计学意义了。说明血清中含有兴奋M受体的生物活性成分,如乙酰胆碱(Ach)等,可以引起类似的增强膀胱平滑肌收缩频率的作用。炙甘草汤能否诱导血清中Ach或类似Ach的活性成分的增加,尚无确切的依据。
43炙甘草汤含药血清对兔膀胱平滑肌活动力的作用如图3所示,膀胱活动力叠加了收缩强度和收缩频率两个影响因素。低、中浓度炙甘草汤含药血清组均显示出增加膀胱平滑肌活动力的作用。排除空白血清自身作用后,低浓度含药血清依然可增强膀胱平滑肌的活动力。以低浓度含药血清组作对照,维拉帕米和阿托品均能够阻断低浓度炙甘草汤血清的兴奋作用。说明,炙甘草汤低浓度含药血清对膀胱平滑肌的兴奋作用可能通过两条途径有关,一方面兴奋钙通道,增加Ca2+内流,增加膀胱平滑肌收缩强度;另一方面兴奋M受体,增加膀胱平滑肌收缩频率。但其兴奋作用没有浓度依赖性的增加,可能与其双向调节作用有关[1]。说明在剂量增加的情况下诱导机体产生的生物活性物质发生了变化,兴奋作用反而减弱。[KG)]
5结论
低浓度炙甘草汤含药血清组对膀胱平滑肌条具有兴奋作用,随着剂量的增加其兴奋作用反而减弱,这与剂量增加的情况下诱导机体产生的生物活性物质发生变化有关。炙甘草含药血清对增加膀胱平滑肌收缩强度和收缩频率的单一影响不确定,但叠加收缩强度和频率两种因素后,低浓度炙甘草汤含药血清对膀胱的兴奋作用确切。通过添加阻断剂反向证明,炙甘草汤低浓度含药血清对膀胱平滑肌的兴奋作用可能与兴奋钙通道和M受体两条途径有关。该机制可能是炙甘草汤对各系统平滑肌作用的共性基础[4-5]。炙甘草汤兴奋钙通道是通过哪些中间产物[FL)][SD1,1][FQ(11*3/2。175mm,X,DY-W][SQ+1mm][CD=175mm]发挥作用,兴奋M受体的作用是否与Ach相关,其双向调节作用的机制与诱导血清内成分改变的关系等,还有待于进一步实验证明。[KH*1D]
参考文献:
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【关键词】 内质网; 衣霉素; 葡萄糖调节蛋白78; 凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白; 小鼠
内质网(endoplasmic reticulum, ER)广泛存在于真核细胞中,是蛋白质合成、折叠、运输以及细胞内钙离子储存的主要场所。内质网中钙离子紊乱和未折叠蛋白质蓄积可引发内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS),发生具有保护作用的未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR)。内质网应激直接影响应激细胞的转归,如修复、损伤或凋亡。神经系统许多疾病与内质网应激相关。最近的研究表明,内质网应激介导的凋亡信号传导途径可能与阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)的发病有关。本研究观察滋补脾阴方药(Zibu Piyin Recipe, ZBPYR)含药血清对由N糖链抑制剂衣霉素(tunicamycin, Tm)引起的内质网应激的影响,以探讨其神经保护机制。
1 材料与方法
1.1 实验药物 滋补脾阴方药由清代吴澄《不居集》中资成汤加味而成,由红参30 g,山药15 g,茯苓15 g,白芍15 g,丹参12 g,白扁豆15 g,莲肉20 g,石菖蒲10 g,远志10 g,檀香4.5 g,橘红9 g,甘草9 g组成,均购自大连医药集团药材公司。中药常规水煎,每毫升中药液含生药3.29 g,4 ℃保存备用。
1.2 主要试剂和仪器 达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco's modified eagle's medium, DMEM)和胎牛血清,Gibco公司产品;胰蛋白酶和TRIReagent,Sigma公司产品;Tm,星形孢菌素(staurosporine, STS),日本Wako公司产品;细胞毒性检测试剂盒,Roche公司产品;RNase OUT和Oligo (dt),Invitrogen公司产品。二氧化碳恒温培养箱,Thermo Forma公司产品;台式高速冷冻离心机,Sigma公司产品;UV754紫外分光光度计,上海分析仪器总厂产品;温度梯度PCR扩增仪,Thermo Hybaid公司产品;酶标仪,美国BIOTEKTM公司产品;凝胶成像分析系统,UVP公司产品。
1.3 中药血清制备 取健康雄性SD大鼠(220~250 g)12只,随机分为对照组和ZBPYR组,每组6只。适应饲养3 d后,ZBPYR组给予滋补脾阴方药灌胃,10 ml/kg体质量,此剂量灌胃2次/d,连续3 d;对照组给予等体积生理盐水灌胃。于末次给药后1 h腹主动脉取血,静置2 h,2 000 r/min,4 ℃离心15 min分离血清,离心半径为16.1 cm,56 ℃,30 min灭活。0.22 μm滤膜过滤除菌,-20℃保存备用。
1.4 Neuro2a细胞的培养 小鼠神经瘤母细胞Neuro2a细胞株由日本北海道大学药学部野村靖幸教授惠赠。细胞常规复苏后加入培养液于5% CO2、37 ℃培养箱培养。细胞单层长满后用终浓度为0.25%胰蛋白酶37 ℃条件下消化3 min,以1∶3传代。培养液含90% DMEM、10%胎牛血清和1%双抗。细胞长至第三代可以使用。
1.5 乳酸脱氢酶释放试验 Neuro2a细胞接种后分为对照组、10%空白血清组、5%ZBPYR组、10%ZBPYR组、15%ZBPYR组、Tm(5 μg/ml)组、10%空白血清+Tm(5 μg/ml)组、5% ZBPYR+Tm(5 μg/ml)组、10% ZBPYR+Tm(5 μg/ml)组、15% ZBPYR+Tm(5 μg/ml)组。细胞单层长至70%时按以上分组给予相应刺激。刺激后细胞放入5%CO2、37℃培养箱继续培养48 h后用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放试验检测LDH泄漏率。LDH实验步骤按试剂盒说明执行。LDH泄漏率为细胞上清中LDH活性与细胞总的LDH活性比值。LDH活性测定用酶标仪于490 nm处检测。另外Neuro2a细胞接种后分为对照组、STS(0.1 μmol/L)组、10%空白血清+STS(0.1 μmol/L)组、15% ZBPYR+STS(0.1 μmol/L)组,待细胞单层长至70%时按以上分组给予相应刺激。刺激后细胞放入5% CO2、37 ℃培养箱继续培养48 h后检测LDH泄漏率。
1.6 逆转录聚合酶链式反应 实验分组同前。细胞单层长至90%时按以上分组给予相应刺激。细胞放入5% CO2、37 ℃培养箱继续培养6 h。总RNA的提取和逆转录聚合酶链式反应。(1)收集细胞用TRIReagent提取总RNA。用紫外分光光度计测定A260/A280,计算RNA浓度。(2)逆转录反应。反应体系为20 μl。取2 μg总RNA,加二乙基焦磷酰胺(diethyl pyrocarbonate, DEPC)水至总体积为9 μl,加0.5 μl Oligo (dt) 1218引物混合后,置70 ℃变性10 min。然后加入下列成分:5×第一链缓冲液5.875 μl、10 mmol/L dNTP 2 μl、0.1 mol/L DTT 2 μl、RNase抑制剂0.5 μl和逆转录酶0.125 μl,混合使反应总体系为20 μl。放入46 ℃反应1.5 h,70 ℃变性15 min,冰上5 min后进行扩增。(3)PCR反应。在0.2 ml PCR管中加入1.2 μl逆转录产物、sd H2O 9 μl、10 mmol/L dNTP 0.24 μl、10×PCR缓冲液1.2 μl、聚合酶0.12 μl、上游引物(20 μmol/L)0.12 μl、下游引物(20 μmol/L)0.12 μl,总反应体系为12 μl。(4)PCR产物观察。PCR产物经40%丙烯酰胺凝胶电泳后,EB染色15 min,用凝胶成像系统进行拍照及图像分析,然后计算待测基因与内标磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde phosphate dehydrogenase, GAPDH)吸光度的比值。PCR反应扩增参数如下:葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78),94 ℃ 5 min,94 ℃ 1 min,55 ℃ 1 min,72 ℃ 1 min,循环22圈,72 ℃ 5 min;凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/EBP homologous protein, CHOP),94 ℃ 5 min,94 ℃ 1 min,60 ℃ 1 min,72 ℃ 1 min,循环25圈,72 ℃ 5 min;GAPDH,94 ℃ 5 min,94 ℃ 40 s,58 ℃ 30 s,72 ℃ 40 s,循环28圈,72 ℃ 5 min。引物序列见表1。
表1 引物序列(略)
Table 1 Sequence of the primers
1.7 统计学方法 每组实验重复4次,图像分析采用LabWorks 4.6专业图像分析软件。数据用SPSS 13.0软件进行分析,两组间差异比较采用t检验。
2 结果
2.1 LDH释放试验检测ZBPYR含药血清对Tm刺激Neuro2a后LDH泄漏率的影响 各浓度含药血清和10%空白血清组与对照组相比,LDH泄漏率差异没有统计学意义,说明血清对Neuro2a细胞没有毒性作用;Tm(5 μg/ml)组与对照组相比,LDH泄漏率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);10%空白血清预处理组LDH泄漏率与Tm组相比,差异无统计学意义;而各浓度ZBPYR含药血清预处理组与Tm组相比,LDH泄漏率下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。10%药物血清预处理组与10%空白血清预处理组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。
2.2 RTPCR方法观察ZBPYR含药血清对Tm刺激Neuro2a后GRP78 mRNA表达的影响 各浓度含药血清和10%空白血清组与对照组相比,GRP78 mRNA表达差异无统计学意义,说明血清对Neuro2a细胞GRP78 mRNA表达没有影响;Tm(5 μg/ml)组与对照组相比,GRP78 mRNA表达明显增强(P<0.05);而加入血清预处理1 h后再加入浓度为5 μg/ml Tm各组与Tm(5 μg/ml)组相比,GRP78 mRNA表达明显下降(P<0.05),其中ZBPYR含药血清预处理组GRP78 mRNA表达较空白血清预处理组GRP78 mRNA表达下降更加明显(P<0.05)。见图2。
2.3 RTPCR方法观察ZBPYR含药血清对Tm刺激Neuro2a后CHOP mRNA表达的影响 各浓度含药血清组与对照组相比,CHOP mRNA表达差异无统计学意义,说明血清对Neuro2a细胞CHOP mRNA表达没有影响;Tm(5 μg/ml)组与对照组相比,CHOP mRNA表达增强(P<0.05);10%空白血清预处理组与Tm(5 μg/ml)组相比,CHOP mRNA表达差异无统计学意义;而各浓度ZBPYR含药血清预处理组CHOP mRNA表达与Tm(5 μg/ml)组相比,差异有统计学意义(P<0.05);10%药物血清预处理组与10%空白血清预处理组相比,CHOP mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。见图2。
图1 LDH检测Tm刺激细胞后各组细胞LDH泄漏率(略)
Figure 1 LDH leakage from each group treated by Tm
**P<0.01, vs normal control group; P<0.05, P<0.01, vs Tmtreated group; P<0.05, vs 10% control serumtreated group (n=4 for each group).
图2 RTPCR法观察Tm刺激各组细胞后GRP78和CHOP mRNA表达(略)
Figure 2 Expressions of GRP78 and CHOP mRNAs in different groups treated by Tm (RTPCR)
Results of RTPCR electrophoresis from each group and values of IOD from each group (n=4 for each group). *P<0.05, vs normal control group; P<0.05, vs Tmtreated group; P<0.05, vs 10% control serumtreated group.
2.4 LDH释放试验检测STS刺激Neuro2a后LDH泄漏率的变化 STS 0.1 μmol/L组与对照组比,LDH泄漏率升高(P<0.01);而加入15%空白血清预处理组与STS组相比,LDH泄漏率下降(P<0.05);15% ZBPYR含药血清预处理组与STS组相比,LDH泄漏率下降(P<0.01);15% ZBPYR含药血清预处理组与15%空白血清预处理组相比LDH泄漏率下降更加明显(P<0.05)。见图3。
图3 LDH检测STS刺激细胞后各组细胞LDH泄漏率(略)
Figure 3 LDH leakage from each group treated by STS
**P<0.01, vs normal control group; P<0.05, P<0.01, vs STStreated group; P<0.05, vs 15% control serumtreated group (n=4 for each group).
3 讨论
ERS是细胞的一种应激反应过程,糖饥饿、钙平衡紊乱、糖基化抑制和二硫键合成减少等情况下,内质网的微环境发生改变,蛋白质的折叠受到影响,导致大量未折叠或错误折叠的蛋白质堆积于内质网内,由此引起一系列以分子伴侣和折叠酶表达上调为标志的应答反应,称为未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR)。通过UPR细胞才能在应激情况下存活。分子伴侣GRP78与凋亡促进因子CHOP是ERS时表达增多的两种分子,被看作是ERS的标志,在ERS中起着不同的作用。其中GRP78能保护细胞,而CHOP则是促进细胞凋亡。因此通过药物干预后研究它们的表达情况可以进一步了解药物对ERS的作用。AD是一种常见的神经退行性疾病,病理特征为淀粉样蛋白的沉积、神经原纤维缠结、tau蛋白异常磷酸化和区域选择性神经元死亡[1]。AD与基因突变有关,主要有编码淀粉样蛋白前体基因(amyloid protein precursor, APP)和早老素(presenilin, PS)基因,这些基因都与内质网有关。AD相关的早老素突变,诱导内质网应激反应并且通过改变APP的蛋白水解加工作用而部分地增强对应激诱导的凋亡的易损性。PS1突变通过细胞表面有活性的钙离子流入的直接减少,不依赖APP,并间接地通过APP处理作用和淀粉样肽的产生增加内质网钙离子释放来解除对神经元钙离子稳态的控制。这种钙离子稳态的干扰将改变APP的加工,过量生成β淀粉样蛋白142(amyloid βprotein 142, Aβ142),同时内质网钙失衡,激活钙蛋白激酶,切割内质网膜上的caspase12,从而激活caspase12介导的内质网特异性凋亡路径,最终形成AD的病理变化[2]。除了钙离子失调,PS突变下调UPR并增强对内质网应激的易损性[3]。PS1突变还诱导了一个内质网中与应激介导的凋亡途径有关的凋亡前因子CHOP的表达[4]。PS是γ分泌酶复合物的一部分,与β分泌酶一起,裂解APP产生Aβ,并且PS突变增加总Aβ和Aβ142的产生。Aβ能直接引发内质网的钙离子释放并且诱导了内质网应激和神经毒性[5]。因而,在AD中内质网应激是引发和调节神经元死亡的一个主要事件。现有研究显示在AD神经元死亡中内质网应激凋亡途径和线粒体损伤的凋亡途径相互影响,起着调控凋亡级联反应的作用[6]。中医认为人体的生长、发育和衰老与“肾”密切相关。“肾精虚衰”是衰老的主要原因。同时又认为“脾胃为血气阴阳之根蒂”,“脾胃既和,其人寿;脾胃不和,其人夭”,因此也重视奉养脾胃精气在延年中的作用[7]。老年痴呆发病于老年期。老年期脾胃气衰,饮食减少,脾虚则化源不足,脑髓失养,神机失调而发为本病。因此脾虚是老年性痴呆的基本病机,脾的功能衰退在老年性痴呆发病过程中起着主导作用,并贯穿于全过程[8]。脾的生理功能是脾之阴阳共同作用的结果。脾阴是指存在于脾脏的阴液(包括血、津液和水谷精微等)和脾的物质形态及其滋润濡养功能。由于脾与大脑关系密切,脾阴亏虚严重影响大脑的意识、学习、思维、记忆和情绪等功能,导致一系列与脑相关的精神意识病证如意识不清、学习记忆能力下降和情绪失常等。因此,滋补脾阴应当是防治老年痴呆的一个重要措施。滋补脾阴方药由清代吴澄《不居集》中资成汤加味而成,以人参补脾益气生津,山药益胃补脾养阴,白芍养阴缓急,丹参活血养血益阴,茯苓健脾安神益智等,共奏健脾益阴之效。本组以往的研究显示,滋补脾阴方药能通过改善老龄大鼠脑细胞线粒体膜Na+K+ATP酶、Ca2+Mg2+ATP酶活性,调节膜磷脂代谢障碍和修饰膜的作用[9],以及延缓兴奋性氨基酸受体N甲基D门冬氨酸(NmethylDaspartic acid, NMDA)受体、γ氨基丁酸(gammaaminobutyric acid, GABA)受体染色阳性神经元在衰老过程中丧失,同时抑制神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)的表达,起到神经保护、延缓脑衰老的作用[10]。本实验中Tm刺激Neuro2a细胞LDH释放试验结果表明,在加入滋补脾阴方药含药血清预保护后,可以明显降低Tm刺激细胞后的LDH泄漏率,结合RTPCR观察到滋补脾阴方药含药血清预处理后,内质网应激标志物GRP78及CHOP mRNA的表达受到抑制,两种实验结果的同步性可以推断滋补脾阴方药具有抑制内质网应激的作用。STS刺激Neuro2a细胞LDH释放试验结果表明,加入滋补脾阴方药含药血清预处理后,可以明显降低STS刺激细胞后的LDH泄漏率(STS是线粒体凋亡途径诱导剂)。因而表明滋补脾阴方药同时具有保护线粒体损伤的作用。以上的研究结果为滋补脾阴方药应用于临床防治AD提供了依据。AD是一种常见的神经退行性病变,其发病机制复杂,目前尚无有效的治疗手段,对社会和人们的生活造成严重的负担。现有的研究表明,神经元的凋亡在AD的发病过程中起着重要的作用。而内质网应激凋亡途径和线粒体损伤的凋亡途径已被证明在AD的发病过程中起着协同作用。我们的实验证明,滋补脾阴方药对内质网应激凋亡途径和线粒体损伤的凋亡途径具有双重作用,因而有助于AD的防治,加之中药治疗有着毒副作用低、经济实惠的优点,更易于为人们所接受。
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大胆运用对比色
邀请函能让宾客形成对婚礼的第一印象,因此,混合使用那些大胆的色彩,如艳粉、深蓝或者是花式字体将会形成强烈的视觉冲击力,带来很不错的效果。
添加3d效果
把这些现代元素注入婚礼邀请函中,让它呈现出更多立体效果,如在卡片上点缀一些闪耀发光的心型装饰物,或者用经过特殊处理的鲜花装扮邀请函,或者在卡片上添加绸缎的蝴蝶结等。
保留邮票
在邀请函上用一个特别的纪念邮票。譬如:有经典图案或是有代表意义的邮票,你们还可以利用相关网站,设计自己喜欢的邮票风格。
亲手制作地图
制作一个手绘的个性化地图,标注出你们最中意的婚礼场地是个不错的选择,这样,也可以大大节省制作成本。
我的未婚夫是个汽车发烧友,所以我决定把请柬做成赛车明信片的样子。首先,我把汽车公路赛的示意图印在上面,在上面标出教堂和宴会的大概位置。在公路赛的起点,我和他分别被画做赛车的车头和车尾,经过了一段短暂的路程,我们结合了,最终在终点站我们合并成为一辆漂亮完整的小汽车!
rachel XX.4.24
我们两个都非常喜欢看电影,不如把我们的婚礼作为一场电影,而要吸引观众来看,就首先要他们看一下宣传短片,然后如果他们喜欢才会买票来电影院观看电影。
按照此思路,我们制作了一个dvd短片作为邀请函。我们将历史上几个最经典的银幕之吻刻录其中,再配上一个我和他的热吻。噢,其实我们并没有吻上。接着,一个深沉的声音响起来,如果你想看我们真正的热吻,就快来参加我们的婚礼吧!短片最后的演职员表里是我们的名字、婚礼时间和地点等相关信息。
以电影票的形式制作了回函卡,上面留有空间可以写下被邀请人的姓名;如果他确认能来,就打一个v,并写上会带几个人人参加。
mandy XX.10.11
我收藏了许多行李托运标签用来制作美丽的邀请函,在标签上方的小孔上,用丝线将一片薄荷叶系在标签上,这样的邀请函是不是很特别呢?
marsha XX.5.1
我和他第一次见面是在一个美丽的植物园,于是我决定就用这个主题来制作邀请函。我买来纸张,接着去那个小花园采来野花和小草,将它们制成标本贴于纸上。当然我不会忘了附上一小枝一串红,那是我对每位嘉宾最真挚美好的祝福。
meredith XX.5.5
当然,在邀请函上我也动了不少心思,每张邀请函都是我特别制作的。而后我买来漂亮的丝绸小盒子来放我的邀请函,每个盒子里还放了一小包花籽,还有一枝薰衣草。最终功夫不负苦心人,所有的嘉宾都非常喜欢我的小制作。我的几位好朋友甚至把空盒子放在家里的展示柜里作为永久的纪念。
婚礼邀请函范文
送呈:xxx先生台启
公历年月日
谨订于(星期日)
农历年月日
为***先生和**小姐举行结婚典礼敬备喜筵
关键词:任务情境;创设原则;探究学习
在任务驱动教学法中,任务设计是核心,围绕着任务而创设的情境是有效实施任务驱动的基础。文章以计算机基础教学为例,对任务情境创设进行探讨。
任务情境创设的原则
任务驱动教学的展开,起始于有效任务情境的设计。任务驱动式教学必须依赖于恰当的任务情境才能调动学生的积极性,主动参与到任务的确立、分析等活动中,才能充分发挥学生的主体性,实现学生意义的建构。要创设理想的任务情境,我们应遵循以下几个原则。
1.目标性原则
任务情境与教学目标相联系。先选择典型的教学内容,然后根据教学目标创设任务情境。
2.贴近生活原则
任务情境与现实生活相适应。教师所创设的任务情境要适应学生真实的生活环境,结合学生日常熟悉的生活情境,加强学习内容与生活的联系,调动学生主体性的积极发挥。
如创设“撰写竞选自荐信”、“制作个人简历”、“分析班级学期成绩”及 “学校形象宣传”等情境。
3. 贴近专业原则
任务情境与学生所学专业相适应。教师所创设的任务情境要适应学生所学的专业,关注行业,结合专业。 如 “制作动漫节邀请函”等任务情境。
4. 学生主体性原则
任务情境与学生已有知识经验相联系。从学生已有的知识结构出发,把情境置于学生的最近发展区,使知识的学习过程形成阶梯式的上升过程。如,创设“制作宣传手册”、“企业产品推介”等任务情境。
任务情境创设的步骤
贴近学生学习、生活及将来就业的场景进行情境创设。以“制作校园动漫节邀请函”任务为例,任务情境的创设步骤如下:
1.根据学习目标,分析任务内容
本单元的学习目标主要为邮件合并、页眉页脚设置、项目符号与编号设置。学习目标的重点难点是邮件合并,邮件合并的主要功能是生成批量文档。任务定位为批量文档的生成。
2.结合学生生活(或专业), 分析任务形式
笔者所教班级专业为动漫专业,结合专业活动,将任务定位为“校园动漫节邀请函”。
3.结合已有知识,确定任务具体要求
学校将举办校园动漫节,现需要制作一批动漫节邀请函,并邮递分发。
任务情境在教学实施中的效果
以制作校园动漫节邀请函为例。任务情境在教学实施中起到显著的效果。
1.调动学生学习积极性
此任务情境把学生带入真实场景。学生在教学过程中发挥主动性,以主人翁的身份,体验完整的工作过程――“资讯―计划―决策―实施―检查―评估”。首先,在老师的指导下,讨论分析制作邀请函的格式和要求,明确任务;其次,完成任务;最后,通过检查评估,修改完善作品。
2. 自主探究,培养学习能力
任务实施阶段分为两大阶段,第一阶段,因学生已具备一定的文档编辑和格式设置能力,在原有知识的基础上,通过自学及小组讨论完成表-1中子任务(1)――制作邀请函文档和子任务(3)――制作邀请函封面。第二阶段,是新知识的学习。学生通过看书、查看教学视频等学习资源,小组讨论、自主探究邮件合并等知识技能,完成子任务(2) ――通过邮件合并生成批量邀请函及子任务 (4) ――制作一批信封标签。培养了学生的探索和自学能力。
3.真正发挥学生在学习活动中的主动性
⒈ 封面 通常会展活动商务邀请函的封面会显示此商务函的性质。普通的商务邀请函(信)封面以会展活名称、主题、主办机构、时间、地点五项内容为主;而特殊的商务邀请函(信)。则在封面上只注明会展活动组织者或项目的名称、收信机构或人员的相关信息并注明“通知、特函、”等字样。
⒉ 标题 由会展活动名称和“邀请函(书)或(信)”组成。
会展活动名称可以分为三个部分:基本部分、限定部分和附属部分。其中基本部分和限定部分构成展览会名称的主体。例如:第十届中国家电产品博览会邀请函(信)、第十二届中国国际机床机电展览会邀请函(信)。
⒊ 称呼 邀请函的发送对象有三类情况:
(1)发送到单位的邀请函,应当写单位名称。由于邀请函是一种礼仪性文书,称呼中要用单称的写法,不宜用泛称(统称),以示礼貌和尊重。
(2)邀请函直接发给个人的,应当写个人姓名,前冠“尊敬的”敬语词,后缀“先生”、“女士”、“同志”等。
(3)网上或报刊上公开的邀请函,由于对象不确定,可省略称呼,或以“敬启者”统称。
⒋ 正文 正文应逐项载明具体内容。
第一部分背景说明。写明举办会展活动的背景和目的;
第二部分组织说明。对会展活动组织结构的进行介绍,包括的主办者、协办者、承办者等;
第三部分是时间与地点。根据会展活动设定的举办日期、结束日期与举办城市、地点进行描述。
第四部分是会展活动的具体内容介绍。
主要包括了会展活动的展区划分、展品设定、同期活动、展示服务、会展活动的特点、会展活动的收费标准等相关内容;第五部分联络信息。写明联系联络信息和联络方式,包括传真、电话、邮箱、负责人等。结尾处也可写“此致”,再换行顶格写“敬礼”,亦可省略。
⒌ 回执 回执是被邀请方根据需要和可能而给予的一种反馈信息。通常会展活动的回执内容格式统一的会展组织者进行制定。包括了:参与者单位信息、参与类型、具体展位或广告位、会议活动预定事项、参与人员信息、参与时报到信息说明等。
⒍ 落款 会展活动邀请函的落款,通常是会展活动的组织机构名称加盖相关印章。如果是多家机构共同主办或承办,则由多家机构共同签名盖章。以证明此邀请函(信)的真实性与合法性。同时注明邀请函(信)的制作时间。