时间：2022-12-28 12:43:49
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【摘要】目的 评价贝克曼全自动化学发光免疫分析仪检测甲状腺激素的效果。方法 测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,分别计算批内精密度、批间精密度、回收率和线性范围。结果 T3、T4、FT3、FT4、TSH的批内精密度分别为4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%,批间精密度分别为6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%,回收率分别为96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%,线性范围分别为0.15～12.3 nmol/L、3.9～387.0 nmol/L、0.3～30.8 pmol/L、1.3～155.0 pmol/L、0.01～150.0 mIU/L。结论 贝克曼全自动化学发光免疫分析系统测定甲状腺功能具有重复性好、准确度高、可报告范围宽、测定速度快等优点,适合于临床应用。
【关键词】化学发光免疫分析法;甲状腺激素
化学发光免疫分析法是20世纪80年代以来发展起来的一项新的标记免疫技术,在临床上有广泛的应用,包括内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病、心血管疾病标志物、贫血及过敏原等,特别是在甲状腺激素检测中应用更为广泛[1]。本文采用贝克曼全自动化学发光免疫分析仪检测T3、T4、FT3、FT4、TSH,对其方法学进行综合评价。
1 材料与方法
1.1 仪器贝克曼全自动化学发光免疫分析仪。
1.2 试剂发光试剂、质控品、标准品由贝克曼公司提供。
1.3 血清来源试验所需血清样本采自本院门诊和住院患者,每例取3ml血,离心3000 r/min,10分钟,取血清-70℃保存备用。
1.4 检测方法利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗夹心法、竞争法相似,严格按试剂盒操作说明书操作。
1.5 评价指标
1.5.1 批内精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三种浓度的血清样本,每种浓度同批平行测定10次,计算平均变异系数(CV)。
1.5.2 批间精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三种浓度的血清样本各10份,每天各测定1次,共测定10天,计算平均变异系数(CV)。
1.5.3回收率:由贝克曼公司提供原装3个浓度的标准品,分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每个浓度平行测定3次,计算平均回收率。
1.5.4 线性范围收集患者血清标本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH浓度高于厂家提供线性范围上限作为高值浓度水平(H),厂家提供稀释液作为低值浓度水平(L),用稀释液稀释高值浓度血清,形成如下系列浓度检测标本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列浓度标本平行测定各项指标含量,取平均值作图,取在坐标纸上呈明显直线趋势的各点值进行直线回归统计,取回归系数r大于0.9的浓度范围为可报告的浓度线性范围。
2 结 果
2.1 批内精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均变异系数分别为4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。
2.2批间精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均变异系数分别为6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。
2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分别为96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。
2.4 线性范围T3所测结果得到回归方程为y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距经t检验,ta=1.36,0.95,截距经t检验,ta=0.36,
3 讨 论
血清中三碘甲状原腺氨酸(T3)、四碘甲状原腺氨酸(T4)、游离三碘甲状原腺氨酸(FT3)、游离四碘甲状原腺氨酸(FT4)、促甲状腺激素(TSH)的测定对甲状腺疾病的诊断具有重要价值。以往国内实验室多采用RIA、MIRA检测血清甲状腺激素水平,此法虽较准确,仪器与试剂也较为低廉,但对操作人员水平要求较高,对实验条件及环境有较多要求,且随着标记抗原的放射性衰减,而使计数不稳定及曲线失真,导致结果偏离,结果重复性差,且可产生放射性污染[2,4]。
近年来发展起来的全自动化学发光免疫分析系统是利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗体夹心法、竞争法相似。其优点是[3,5]:(1)成熟的单克隆抗体技术或独特的磁性微粒子技术,保证了反应的高特异性;(2)检测范围宽,具有良好的稀释线性;(3)试剂稳定性好,不需酶促反应,有效期可长达半年;(4)操作简便,分析过程采用全自动化,减少了人工操作误差,重复性好;(5)试剂及标本均采用无吸附材料,故相互间的交叉污染率低,干扰因素少;(6)真正的随机连续检测,样本随到随测,具有急诊优先插入功能。因此全自动化学发光免疫分析系统是目前检测甲状腺激素等指标的较好方法。
【参考文献】
[1] 陶义训.免疫学和免疫学检验[M].第1版.北京:人民卫生出版社,1997:174.
[2] 叶任高,陆再英.内科学[M].第6版.北京:人民卫生出版社,2004:725.
[3] 罗炜,王慧,陈柏铭.化学发光免疫法与放射免疫法测定血清AFP的比较[J].上海医学检验杂志,2000,15(3):149.
本文阐述在ARCHITECTi2000SR全自动化学发光免疫分析仪应用实践中进行使用方法的改良，极大地方便了仪器操作者的使用，有效地避免了使用过程中的差错的发生。解决故障的过程有助于思路的扩展，对使用其他的检验仪器有很好的启发作用和较大的参考或应用价值。
关键词：全自动化学发光免疫分析仪；标本容易加错现象；标本识别移位故障；改良方案
【中图分类号】
R249 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）07-0272-01
Architect i2000SR全自动免疫分析仪是由美国雅培公司研发的第三代大型全自动免疫分析仪，采用化学发光的原理进行检测，具有较高的灵敏度、特异性和稳定性，具有检测速度快，测量范围宽广等诸多优点，且可与生化模块C8000相连。且检测试剂稳定并易于进行室内与室间质量控制。然而全自动化仪器的高故障率亦对检验技术人员提出了更高标准的要求。本文即是作者在雅培i2000SR全自动化学发光免疫分析仪应用实践中遇到的：容易出现加错标本，和机器本身出现标本识别移位的故障现象，分析其原因、探讨改造方案并付诸实践成功解决故障的过程，以便应用到其他的现代化的检验设备使用中去。
1 标本容易加错的改良方案
1.1 标本容易加错的现象：
由于该机器的原来的设计是每个标本架只有5个孔，也就是每个标本架只能放置5个标本，这样就使使用者放置标本时，必须要好好的记着所加标本的原来的编号，待放到架子上时要好好的计算出标本的位置是在第几个架子、第几号位置编号。譬如：手里拿着16号标本需要放置到标本架子上时，就必须计算出是第4个架子的第1号位置才是16号的位置。是非常的不方便吧？
1.2 标本容易加错现象的解决方案：
因为我发现了这个非常不容易计算出所要加的标本位置，并且又很容易加错标本，工作起来非常不方便的现象时，就一直在脑子里寻求一个解决这个问题的方案。
不久我就想出来了个解决的办法：那就是在每个标本架的靠近1号位置端，设计出了一个不干胶贴，上端标明1、2、3、4……架子号顺序号，下端标明该架子的5个标本号在该架子上的应有的顺序范围。详见附图1改造后的第一个托盘俯视图
2 标本识别移位故障的改良方案
2.1 故障现象：
应用ARCHITECTi2000SR全自动化学发光免疫分析仪进行批量编程，每个标本架放置5个标本，每5个标本架为一组，每一组用一个托盘托起，即标本号依次为1-25、26-50、51-75、76-100四组。在全部标本仪器检测完成后，对HBsAg阳性标本利用金标法复查时，偶然发现阴阳性结果极为不符合的现象。遂对每个标本对应的架号、位置、结果逐一排查，发现个别标本架上的标本并没有消耗（即没有被取样），但却赋上了数值。经逐一检查仪器所加样本与操作者编程的标本架号位置明显不同，即发生了跳跃，如31号标本所赋值实为36号样本测试值或其它样本值。
2.2 故障分析：
经与使用ARCHITECTi2000SR全自动化学发光免疫分析仪的兄弟单位工作人员及雅培中国工程师沟通，了解其工作过程原理是：利用ARCHITECTi2000SR化学发光免疫分析仪批量编程1-25、26-50、51-75、76-100号标本架号位置后，仪器会首先会进行标本架条码扫描，同时也给每个标本进行扫描。如果某个标本架的条码没有扫描到，则机器会自动顺延一个标本架进行操作，这样就会出现跳架移位现象，也就是我们上述的故障现象。譬如仪器在批量编程，31-35号标本架的条码扫描过程中没有扫到，仪器则默认该架子不存在，标本也不存在，跳过了该标本架，将36-40号标本架或及其它标本架上的标本默认为31-35号标本。以后的标本均以同样的方法顺延赋值，即后面的所有标本均顺延了5个号码，如不复查而直接报告传输的结果，必然出现张冠李戴的严重后果。上述现象并非偶然，随着工作量的增加，出现的频率越来越高，为日常检验工作带来相当大的不便，工作人员往往会花费很大的时间和精力，去排查或复查标本与结果是否相符，一度认为此仪器的标本识别和处理软件系统存在巨大缺陷。
3 标本识别移位故障的解决方案
通过细致的观察分析、严密的科学探讨和积极的创新实践，我们对ARCHIT -ECT i2000SR全自动化学发光免疫分析仪的进样系统，进行了简单而合理的改良，使上述故障得以完全解决。具体方法如下：
准备100个改造过的与架同高的平口空试管（以合适放置加样杯为宜），利用条码机打印1-100编号号码的条码，分别贴在每个试管上条码器能够扫描到的位置。将这些贴有条码的试管按顺序放置在标本架上，并保持条码向外，易于条码系统识别判读；实验操作时只需将加样杯放置在对应贴有条码的试管上即可。请注意：只需更换加样杯加病人血清标本。更多的标本亦可用类似方法粘贴上1-100或更多的试管条码。
详见附图1 图2所改造的H540试管架俯视图和侧视图
经过如此改良，仪器在进行标本架条码扫描时，同时也会给每个试管条码进行扫描，如果其中某个标本架条码漏扫，但仍会扫描到试管上的条码号，机器则自动的默认标本架的存在，就不会出现跳架移位的现象。
4 思路扩展与推广应用
标本容易加错的解决方案：就是以较小的改造或改良，而改变了原来的设计的不足，避免了工作中容易出现的错误。像这种小的改造可以用到大多数的试管架子是5个试管位置的大型生化分析仪、放免分析仪等的仪器上。
标本识别移位故障的解决方案：类似的跳架移位故障，不仅出现在ARCHIT -ECTi2000SR全自动化学发光免疫分析仪上，在其它设备上，譬如ARCHITEC -Ti4000SR等仪器亦会出现，亦可采用此法进行改造或改良。兄弟单位同类仪器或不同品牌的仪器，出现类似的因为批编程而出现的跳架移位故障亦可借鉴此方法一试，以避免出现数据移位错误，为临床提供准确的检验信息。
【关键词】 ARCHITECT—i2000SR；梅毒螺旋体特异性抗体；性能评价
i2000SR运用的是化学发光微粒子免疫检测法，它能对多项免疫项目进行定性或定量分析。由于在不同的运行环境下相同仪器有可能出现性能差异，本科新仪器投入临床使用前要对该仪器检测系统中的进行性能评价。
1 材 料
1.1 仪器 ARCHITECT—i2000SR全自动免疫分析仪。
1.2 试剂 原装配套试剂盒。
1.3 标本 2012年本院的住院或健康体检者。
2 方 法
2.1 空白实验 使用PBS作为样本测定三次，记录结果。
2.2 精密度 ①日间精密度：使用高、中、低质控品连续测定15天，计算CV值。②批内精密度：使用高、中、低3个水平的血清重复测定15次，计算CV值。
2.3 线性范围 收集略高于线性范围下限的低值血清（L）和略低于线性范围上限的高值血清（H），按5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L梯度进行混合并检测1，对不同浓度的实测值与预测值进行线性回归分析。
2.4 污染携带率 先取一份H值标本，连续测定3次，随后立即取一份L值标本连续测定3次：携带污染率=（L1—L3）/（H3—L3）×100%。
2.5 参考区间验证 按照NCCLS2推荐的要求进行验证，选择经体检排除其他疾病的正常血清标本男女性标本各20名，观察检测结果是否在参考范围内。
3 结 果
3.1 精密度试验结果 高、中、低3个水平血清的批内精密度CV分别为5.54%、7.04%和3.54%，用厂家配套低、高水平质控品测定结果的批间精密度CV分别为8.92%及6.69%，均小于10%。
3.2 空白试验结果 PBS三次结果分别为0.01、0.02和0.01。
3.3 线性试验结果 Y=0.9963X+0.0029，相关系数R2=0.9965。由结果可知，仪器的线性良好，达到说明书的要求。
3.4 携带污染率 携带污染率为0.29%
3.5 参考区间验证 经过验证，检测值均落在厂家给定的参考范围之内，符合率为100%。
4 讨 论
近年来全自动免疫化学发光仪在梅毒特异性抗体定量检测中的应用逐渐受到重视，i2000SR采用微粒子化学发光免疫技术定量测定梅毒特异性抗体。为保证检验质量，实验室对新装的仪器在用于检测临床标本前都应该要做性能评价。通过性能评价发现，该仪器检测梅毒螺旋体特异性抗体的空白试验良好；批内精密度和日间精密度均小于10%，试验表明仪器测定结果稳定，能满足临床应用的要求；通过线性范围的验证发现仪器在厂家给定的范围内线性良好、能满足临床要求；标本的携带污染率低，证明该仪器的自动冲洗管道能力强，能够有效控制交叉污染3；对参考区间的验证结果都在仪器说明书给出的参考范围内。
总之，通过对ARCHITECT—i2000SR全自动免疫分析仪是临床实验室较理想仪器。
参考文献
[1] 邹麟，张莉萍，夏吉荣，田小浪，.全自动免疫分析仪ARCHITECT i2000检测HBV血清标志物性能评价[J].重庆医学，2010，12，39（24）：3353—3354.
【关键词】乙型肝炎病毒标志物；化学发光法；酶联免疫吸附；测定法；对比研究
我国流行性疾病中受到乙肝病毒（HBV）感染的人群占大多数，据研究调查发现，感染人群中60岁以内患者中有8.2%携带乙肝表面抗原[1]。自上世纪80年代以来，临床上普遍使用开展条件要求不高、设备简单的酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法来检测患者的HBV标志物（HBV-M），但其检测结果的稳定性和准确性易受到干扰，很容易在医院实验室检测引发纠纷[2]。为了弥补以上不足，医疗人员逐渐将免疫学检验与化学发光技术相结合形成了化学发光免疫分析法（CLIA），由于具有结果准确、稳定性高、灵敏度高、反应快速、无放射线污染等优点，CLIA分析法成为了研究的热点和趋势，也越来越受到各大医院的重视。现就我科使用酶联免疫吸附分析法（ELISA）和化学发光免疫分析法（CLIA）分别检测HBV-M的结果进行分析，并比较二者的优缺点及结果的一致性[2-3]。
1资料与方法
1.1临床资料310份血清标本都来源于2011年3月――2013年2来我院就诊和住院的患者，其中女性患者140例，男性患者170例，最小患者年龄为8岁，年龄最大患者为63岁，平均年龄38±4.3岁。
1.2仪器和试剂使用的仪器：上海科华ST-360型酶标仪，上海科华ST-36W全自动酶标洗板机，德国罗氏Cobase 411化学发光分析仪、iWO-960全自动酶标洗板机和ae-Lis全自动加样器（没有这两设备）。ELISA试剂盒中标记酶是HRP（辣根过氧化物酶），底物通常选用邻苯二胺和四甲基联苯胺（上海科华生物工程股份有限公司提供）；CLIA法配套试剂由德国罗氏公司提供。
1.3操作方法使用ELISA和CLIA检测310例患者血清标本时，操作步骤严格按说明书操作。按照ELISA试剂盒的说明书要求，每次测定都要设置试剂空白对照，选择手工加样方式进行加样，根据酶标仪显示的检测结果判定阳性及阴性；CLIA检测法中采用e-Lisa全自动加样器加样，定量检测HBV-M过程中，若出现一下结果需要进行复查（设置双空）：HBsAg、HbeAg和抗-HBs均表现双阳性，单独一项呈现出弱阳性、阳性等情况。
1.4数据处理使用SPSS17.0软件包对ELISA和CLIA分别检测到的两组数据统计学处理，P>0.05时不具有统计学意义。
3讨论
20世纪80年代以来，我国大多数医院都以ELISA法检测HBV-M的结果作为判断患者乙肝传染性的标准之一[2]，因为他采用手工加样，具有特异性较好、开展条件要求不高、价格低廉等优点，点在各大医院实验室广泛使用[4]。但其检测容易受到多种因素的影响，而导致结果稳定性较差，易造成假阳性和漏检，如试剂盒运输过程温度、酶的纯度以及反应过程很容易受到外界温度等影响；人工加样时很容易出现漏加等情况；标本接近临界值时ELISA检测试剂或判断标准、操作等原因产生重复性差的现象，这样会引发不必要的实验室检测纠纷[1，4]。而CLIA检测法将免疫学检验与化学发光技术有效的结合在了一起，弥补了ELISA检测法的不足。首先他采用的是自动加样器，降低了人为因素的干扰；其次他的重复性好、结果稳定性强。经ELISA检测乙肝核心抗体抗-HBc，其阳性率明显低于CLIA，这可能与检测方法上的不同有关；一些样通过ELISA，检测为阴性而CLIA检测结果表明他们是一些低浓度样本[2-3]。由此可见，CLIA检测能有效降低漏检现象，对于做好早期预防具有重要意义。
综上所述，由于CLIA检测具有具有结果准确、稳定性高、灵敏度高、反应快、标准化和自动化等优点，同时还弥补了ELISA检测的不足，应该广泛地应用到现代临床诊断中。
参考文献
[1]沈云松，董云华，金敏，牛华.化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物临床应用评价[J].国际检验医学杂志，2009，（05）：437-438+441.
[2]肖琴.酶联免疫吸附试验法和微粒子酶免疫分析法测定乙型肝炎病毒血清标志物的比较研究[J].实用医技杂志，2010，（06）：543-544.
呋喃它酮是一种人工合成的硝基呋喃类抗生素，主要用于畜禽和水产动物的各种肠道感染性疾病的治疗及促进生长的添加剂，曾经在畜禽水产养殖中广泛应用。有关研究证明，呋喃它酮及其代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（AMOZ）具有相当大的毒性和副作用，能诱导有机体基因突变及致畸胎，且能诱发癌症[1，2]。美国、加拿大、中国和欧盟的很多国家都已规定动物源性食品中呋喃它酮及其代谢物AMOZ残留为不得检出。但是因为其价格低廉、疗效好，目前违法使用现象在很多国家仍然存在，故有必要对动物源性食品中呋喃它酮及其代谢物AMOZ加强监控[3]。由于呋喃它酮原药不稳定， 进入动物体内后会被迅速代谢和分解，对原药的检测难度很大，但其代谢物AMOZ可以蛋白结合物的形式长期、稳定存在组织内，在适当的酸性条件下，这些结合残留物可以从蛋白质中释放出来，因此通常将AMOZ作为监测呋喃它酮的靶化合物[1，4，5]。
目前，AMOZ 检测方法主要有色谱法[6～9]、免疫分析法[10] 等。色谱法准确、灵敏，但操作复杂、设备昂贵、检测速度慢，需要专业技术人员。而免疫分析法具有简单、快速、灵敏度较高、特异性强和高通量等优点。免疫分析法的关键是高亲和力和特异性的抗体的制备，其中基因工程重组单链抗体是将天然抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL通过一条柔软的连接肽连接成的单链分子，不仅具有高亲和力和特异性，而且还可以通过工程菌发酵快速大量制备，极大地降低了抗体生产成本，缩短了抗体生产周期。化学发光免疫分析是近十年来发展起来的一项将高灵敏度的化学发光与高特异的免疫分析相结合的新兴的免疫检测技术，具有检测特异性好、检测范围宽、操作简单自动化程度高等优点，能显著提高检测的灵敏度，并且比常用的其他免疫分析法的灵敏度都高[11～14]。迄今为止，文献报道的AMOZ免疫分析法都是建立在传统的多克隆或单克隆抗体基础上的ELISA法，利用重组单链抗体建立的AMOZ化学发光酶免疫分析方法还未见报道。本研究利用重组抗AMOZ衍生物单链抗体，建立了测定虾肉中AMOZ残留的间接竞争化学发光酶免疫分析新方法。本方法简便、快速、准确、仪器设备简单，灵敏度高于ELISA法，测定结果和HPLC-MS/MS法测定结果呈现良好的相关性。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
【关键词】酶联免疫法；电化学发光法：甲胎蛋白；结果对比
作者单位：459000河南省济源市肿瘤医院在健康人群血清中，甲胎蛋白(AFP)的含量较低，一般情况下低于20ng/ml。检测甲胎蛋白含量，可以为原发性肝癌提高较为准确的诊断依据，还可以判断患者的预后质量［1］。酶联免疫法(ELISA)作为经典的免疫方法，应用于甲胎蛋白的检测，而电化学发光法(ECLIA)作为新型检测方法，具有快速、精确、重复性高等特点，逐渐应用于甲胎蛋白的检测［2］。本研究中，采用酶联免疫法和电化学发光法，对2012年1月至2012年6月期间采集的60例血清标本，进行甲胎蛋白的检测，并对两 种检测方法的结果，进行比较和分析。现将结果汇报如下，以供临床参考。
1资料与方法
11一般资料2012年1月至2012年6月期间采集的60例血清标本，其中男32例，女28例，年龄369～695岁。60例血清标本中，33例检测结果显示甲胎蛋白水平处于正常范围，而另外的27例超出正常范围。
12检测试剂、仪器及血样采集
121酶联免疫法严格按照试剂盒操作说明书(购自武汉博世德科技责任有限公司)，通过酶标仪，对甲胎蛋白水平进行检测。
122电化学发光法采用罗氏Cobase411电化学发光自动分析仪，对甲胎蛋白水平进行检测。
13统计学方法所有数据采用SPSS 170统计学软件，进行分析和处理，计量资料以(均数±标准差)表示，P
2结果
通过最小二乘法拟合直线方式，比较酶联免疫法(Y)与电化学发光法(X)检测结果，是否具有相关性，结果表明酶联免疫法与电化学发光法具有线性关系，并且具有高度相关性。首先对两种检测方法的甲胎蛋白检测结果，进行正态分布分析，结果显示符合正态分布，然后对均值，进行t检验，结果显示，在95%的可信区间，双尾检验的P=02875，表明酶联免疫法与电化学发光法的检测结果差异无统计学意义。
3讨论
甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)作为特异性强的原发性肝癌标志物，主要是由胎儿肝脏组织合成，待胎儿娩出后，甲胎蛋白水平急速下降，待出生后几个月或者一个年内，基本降至正常范围，使甲胎蛋白水平低于20ng/ml［3］。大多数原发性肝癌患者体内的甲胎蛋白水平出现异常升高，转移性肝癌患者体内的甲胎蛋白水平也相对较高，但是一般情况下，甲胎蛋白水平不高于350～400IU/ml，而畸胎瘤、急性病毒性肝炎、乙肝病毒携带者，以及酒精性肝硬化患者，由于肝脏组织的代偿性增生，甲胎蛋白水平也有轻度升高。目前，临床实验室检测甲胎蛋白方法中，以放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)、化学发光法(ECLIA)，以及免疫层析法为主［4］。
化学发光法(ECLIA)是近年来才发展起来的新兴技术，作为新型标记免疫分析方法，通过电化学发光与免疫测定相结合的方法，对甲胎蛋白水平进行检测。化学发光法检测方法具有检测速度快、结果精确、检测范围宽、无放射性污染，以及自动化程度高等诸多优点，逐渐应用于临床检验中，但是其检测设备及相应试剂的价格相对比较昂贵，在某种程度上限制了其临床应用；酶联免疫法(ELISA)具有操作简便、成本低廉等优点，被广泛应用于甲胎蛋白的临床检验中，尤其适合基层医院的筛查中，但是其检测敏感性相对较低、准确性和稳定性结果也不够理想。所以，两种方法都存在各自的优点，以及相应的局限性，当酶联免疫检测假阳性或者阳性时，可以通过电化学发光法进行确认。
本研究中，通过最小二乘法拟合直线方式，比较酶联免疫法(Y)与电化学发光法(X)检测结果，是否具有相关性，结果表明酶联免疫法与电化学发光法具有线性关系，并且具有高度相关性。首先对两种检测方法的甲胎蛋白检测结果，进行正态分布分析，结果显示符合正态分布，然后对均值，进行t检验，结果显示，在95%的可信区间，双尾检验的P=02875，表明酶联免疫法与电化学发光法的检测结果差别不大。总而言之，酶联免疫法与电化学发光法都能较为准确的反应甲胎蛋白水平，对于肿瘤的诊断和治疗的预后，提供重要的理论依据。但是，本次研究的标本数量也不是太多，相应的检测范围也不够宽，对于不同检测系统对检测结果的影响方面，还需要进一步的研究和分析。
参考文献
［1］于广名 化学发光法与放射免疫法检测肿瘤标志物的比较(CA199、CA125、CA153、AFP、CEA) 中国中医药咨询，2010，8(2)：203203.
［2］杨洋，汤华，浦永，等甲胎蛋白的液相芯片法检测与方法学评价 网际检验医学杂志，2009，30(1)：9697.
2月-2016年2月笔者所在医院门诊妇科收治的疑似梅毒患者200例为试验对象。所有患者均取晨起空腹静脉血检测，初筛试验采用CLIA法展开特异性梅毒螺旋体抗体试验，再将标本经TPPA与梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）进行复检。比较不同S/CO值标本TPPA与TRUST复检结果。结果：S/CO值12.00标本符合率分别为91.30%、94.87%、97.14%、96.43%、100%，均明显高于TRUST的63.04%、69.23%、68.57%、75.00%、77.78%，差异有统计学意义（P
【关键词】 化学发光免疫分析法； 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验； 梅毒； 血清学筛查
doi：10.14033/ki.cfmr.2017.15.023 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2017）15-0042-02
梅毒是一种传染性较强、病程较长的性传播疾病，可严重损害心血管、神经等多系统，对人们健康危害极大，尤其威胁临床输血安全[1]。此外，梅毒可通过母婴传播这一途径将梅毒传染至胎儿，进而造成先天梅毒、自发性流产。故早期诊治梅毒显得尤为重要。目前临床常用的检测方式为血清学筛查，包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）、CLIA、TPPA、TRUST等。其中ELISA、CLIA、TPPA属于特异性梅毒抗体试验，而TRUST属于非特异性梅毒抗体试验[2]。多数医院采用上述其中的两种方式筛查梅毒，但因选用不同的方式可能导致检测结果产生差异。本研究拟用CLIA法联合TPPA法进行梅毒血清学筛查，探讨其临床应用价值，为梅毒早期诊断提供合理借鉴，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2014年2月-2016年2月笔者所在医院门诊妇科收治的疑似梅毒患者200例为试验对象，年龄23～70岁，平均（36.84±3.26）岁。
1.2 仪器与设备
微量U形反应板、平板混合器、微量滴管（25 μl/滴）、微量加样器（25 μl）。CLIA法采用Chem cline全自动化学发光仪，应用北京科美生物技术有限公司提供的配套试剂盒。TPPA试剂盒由日本富士瑞必欧株式会社提供，包括血清稀释液、阳性对照血清、致敏粒子、溶解液等。TRUST试剂购自上海荣盛生物药业有限公司。
1.3 方法
所有患者均取3 ml晨起空腹状态下静脉血，行离心处理15 min，转速为3000 r/min，血清分离后，制作血清标本，于4 ℃保存。采用全自动分析仪进行CLIA测试，并读取结果。参照实际说明书，S为待测样品发光值，阴性对照品平均发光值的2.1倍为临界值（CO）。S/CO
1.4 统计学处理
采用SPSS 19.0软件进行数据处理，计量资料用（x±s）表示，计数资料以率（%）表示，比较用字2检验，P
2 结果
S/CO值12.00标本符合率均明显高于TRUST，差异有统计学意义（P
3 讨论
梅毒是由苍白密螺旋体感染导致的性传播疾病，其病原体可累及全身所有脏器，引起多器官病变、破坏组织，从而导致功能失常。近年来，随着人们行为观念及生活方式的变化，梅毒发病率呈明显上升趋势，逐渐引起临床重点关注[3]。由于梅毒螺旋体仅存在于人体内，故人是唯一的梅毒传染源。文献[4]显示，95%～98%左右的患者是通过性接触而感染，梅毒螺旋体通过穿透人体正常皮肤及黏膜，从而使健康者感染梅毒。患者染上梅毒后其心血管系统与神经系统严重受损，生命安全受到威胁，同时该病具有较强的传染性，因而积极防治梅毒对维护社会公共卫生安全具有重要意义。
传统上梅毒筛查方式主要有两种，一是初筛以特异性梅毒螺旋体试验，复检应用非特异性梅毒螺旋体试验；另外一种方式中初筛与复检分别应用非特异性与特异性梅毒螺旋体试验。在梅毒血清学筛查中，较高的敏感度是对检查方式的重点要求，目前，CLIA是梅毒初筛试验中应用较为普遍的一种方式，制备梅毒螺旋体抗原，并以辣根过氧化物酶进行标记，与标本中抗体形成双抗原夹心后，洗涤添加化学发光底物，发光强度测定后，依据S/CO值判断标本有无梅毒螺旋体特异性抗体[5]。由于整个检测过程中采用全自动分析仪读取结果，从而充分发挥高自动化的优势，减少认为误差，并避免携带污染。故该检测方法能够对大批量标本进行筛查。但因其敏感度较高，在检测低S/CO值标本时易发生假阳性现象，进而造成误诊，增加临床确诊难度[6]。本研究中，46例S/CO值为1.00～2.99患者中，经TPPA确证为阴性4例，而TRUST复检出17例阴性。该标本多来自肿瘤或透析患者，因此，针对S/CO值较低的患者需谨慎处理，并采用TPPA进行确证，减少假阳性的存在。另外，在CLIA初筛后，TPPA复检符合率为96.00%，明显高于TRUST的74.50%，表明TPPA联合CLIA检测梅毒可有效提高检测准确度，减少漏诊、误诊现象。这是由于TPPA采用人工载体明胶粒子与梅毒螺旋体抗体形成凝集，发生粒子凝聚反应，进而有效检测出血清中梅毒螺旋体抗体，其灵敏度与特异度均具有较高水平。而本研究中CLIA检出率高于TPPA，可能是由药物干扰所致，或是梅毒螺旋体隐性感染。TRUST作为非特异性梅毒螺旋w，可通过观察滴度的变化，以判断梅毒感染情况。但在复检试验中发现，阳性率偏低，存在漏诊率高等问题。故本研究认为，CLIA联合TPPA检测梅毒更具临床应用价值。但需注意的是，TPPA法在实际操作过程中存在检测时间长、操作繁杂、自动化水平低等问题，判读结果时易受人为因素影响，尤其是标本介于阳性与阴性之间，难免出现误差[7]。而CLIA能够实现高通量、高自动化、重复性检测，客观的判读结果，敏感度更高，故更适合应用于初筛试验[8]。由于各检测方式均存在一定的漏诊、误诊现象，临床实际筛查中应注重采用联合的方式进行检测，尤其是对于S/CO值较低的标本，经CLIA法初筛后，应给予TPPA法确证，以确保检测准确度，尽可能的减少误诊、漏诊现象，从而避免医疗纠纷，构建和谐的医患关系。
综上所述，CLIA联合TPPA法在梅毒血清学筛查中具有显著的应用价值，临床可充分发挥CLIA敏感度高的优势，在初筛后应用TPPA法对检测结果进行确证，提高诊断准确度，为临床治疗提供科学依据。
参考文献
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[5]李瑛，李军.TP-ELISA、RPR与TPPA检测诊断梅毒的临床意义[J].陕西医学杂志，2016，45（10）：1398-1399.
[6]夏芳，徐元宏，汪学龙.梅毒螺旋体抗体血清学检测方法的临床应用价值探讨[J].中华流行病学杂志，2016，37（6）：863-867.
化学发光免疫分析包括三大类型: 即标记化学发光物质的化学发光免疫分析、 标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。化学发光免疫分析技术可测定内分泌激素、 肿瘤标志物、 血药浓度、 传染病和心血管疾病标志物、 贫血及过敏原等项目［1］。目前对运动员血清睾酮的检测， 大多采用放射免疫法， 由于其自动化程度低， 不适用于快速检测， 又有放射污染。美国Beckman．Coulter公司和法国Pasture研究院合作生产的Access全自动微粒子化学发光免疫分析仪， 其方法学具有高灵敏性、 高精确性、 高稳定性等特点， 无需对样本进行测前处理， 简便的自动化操作， 全程仅需15～20 min， 且无放射污染。本室引进Access免疫分析系统对运动员血清T进行定量测定， 现对该方法的临床应用评价如下。
1 材料和方法
1.1 检测对象 无锡市体育管理中心运动员122人， 年龄≥15岁， 其中男64人， 女58人。对照组为来我院正常体检的中学生， 男、 女各30人。采运动员清晨静脉血2 mL， 分离血清后进行检测。
1.2 材料 血清睾酮的检测采用Access磁微粒化学发光免疫分析系统。Access免疫分析系统及配套的T试剂盒， 冲洗缓冲液， 碱性液， 酸性液， 定标液， 基质液(Substrste)， 反应杯(RV管)由BeckmanCoulter公司提供。
1.3 方法
1.3.1 标准曲线 分别取0、 1.7、 5.2、 13.9、 27.8、 55.5 nmol/L T标准液， 在Access免疫分析系统中执行自动定标程序。以2次测定结果的均值， 进行数学逻辑处理， 绘制标准曲线。
1.3.2 统计学分析 两组间数据采用t检验。
2 结果
2.1 精密度测试 取低、 中、 高值的混合血清分别重复测定20次， 计算变异系数CV， 反映批内精密度。每天对不同浓度的质控血清测定1次， 连续20 d， 评价批间精密度。低、 中、 高值批内CV分别为4.1、 2.7、 1.6; 批间CV 分别为4.4、 3.2、 2.6。
2.2 血清睾酮检测结果及统计分析 运动员血清睾酮检测结果显示， 男女运动员与各自相同性别正常人对照组之间无统计学意义（P>0.05）。 表1 运动员血清睾酮检测
3 讨论
Access免疫分析通过在RV管中加入包被单克隆抗体的磁性微粒、 血清样品、 碱性磷酸酶(ALP)标记的抗原， 经37℃孵育后， 形成竞争法抗原抗体结合成的复合物。再加入底物 AMPDD(一种金刚基二螺［4， 4］二氧乙烷的磷酸脂)发光剂。AMPDD经ALP水解， 生成一种不稳定的阴离子， 该阴离子分解时持续发光， 且与ALP量成正比， 通过测定相对发光单位(relative light unit， RLU)定量检测血清中物质的浓度［2］。
对运动员血清T检测结果表明， CV％值较小， 说明仪器重复性较好， 测定结果稳定。 T的测定浓度范围在0～55.5 nmol/L之间， 能够满足运动员正常测试的需要。自动化的Access免疫分析系统， 既具有化学发光检测的高灵敏度， 又具有免疫分析的高特异性， 准确性、 稳定性， 能够快速及时的为运动员训练监控提供可靠的依据。另外， 它是用化学试剂来标记抗原或抗体， 避免了因使用放射性核素而带来的对人体和环境的危害。
但由于试剂成本的原因， Access免疫分析系统仍未广泛应用于临床。随着临床需求的进一步扩展， 高灵敏度、 宽线性Access免疫分析系统的将得到广泛应用。
参考文献
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