时间：2022-07-07 16:38:17
绪论：在寻找写作灵感吗？爱发表网为您精选了8篇白猫计划，愿这些内容能够启迪您的思维，激发您的创作热情，欢迎您的阅读与分享！
【关键词】 急性白血病;髓过氧化物酶;毛细管电泳
白血病（leukemia）是累及造血干细胞的造血系统恶性肿瘤。由于白血病亚型不同，诊断标准也有不同，治疗方案及预后亦不尽相同。所以白血病的分型诊断在临床工作中具有重要的指导意义。髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）被认为是髓系特征中最具特异性的标志,在各型白血病的分型诊断中具有重要意义。目前通过细胞化学染色、流式细胞术［1,2］或电镜［3］对MPO的检测及应用Northen、RTPCR等技术对MPOmRNA的检测已有诸多报道［46］。但以上均为定性检测，对MPO的定量检测尚未见文献报道。本研究采用毛细管电泳法 ( capillary electrophoresis,CE)定量检测MPO在不同类型ANLL中的表达，力争为MPO的检测找到一种更为灵敏的方法。
1 材料和方法
1.1 临床资料
36例初发及复发急性非淋巴细胞白血病（acute nonlymphocytic leukemia,ANLL）患者均来自我院2005年6月至2006年1月门诊及住院病人，其中FAB分类M1 4例、M2 7例、M3 9例、M4 6例、M5 8例和M6 2例，男19例，女17例，年龄15-70岁。全部病例均与化疗前采集骨髓制备标本，并常规进行细胞化学染色。对照组30人，男17人，女13人，年龄22-34岁，均为健康 体检者，经询问病史、体检、实验室及影像学检查无异常者。
1.2 试剂及主要仪器
PBS缓冲液（pH=7.4，武汉博士德生物工程有限公司）；淋巴细胞分离液（密度=1.077，济南爱博有限公司）；过氧化氢（H2O2，含量30%，分析纯，江苏徐州试剂二厂，徐州，江苏）；氢醌（H2Q，分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司）；辣根过氧化物酶（HRP，活性>250 u/mg，上海丽珠东风生物技术有限公司）；弹性石英毛细管（内径25 μm，外径375 μm，河北永年光导纤维厂，河北）；碳纤维（直径6 μm，山东大学碳纤维研究中心，山东）；10412普通台式离心机（上海手术器械厂）；高压电源（9323HVPS，北京市新技术应用研究所，北京）；CHI化学分析仪（CHI800型，CHI仪器公司，Austin,TX,USA）；微型电解池（自制）；三电极体系：碳纤维束微盘电极（工作电极），铂丝电极（辅助电极），饱和甘汞电极（SCE，参比电极）；781型磁力加热搅拌器（上海南汇电讯器材厂）；超声清洗机（Branson200型，中美合资必能信超有限公司，上海）。
1.3 实验方法 单个核细胞的分离：所有病例均在无菌条件下抽取骨髓2 ml注入EDTA抗凝试管中，加入4 mlPBS（pH7.4）缓冲液稀释。采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离单个核细胞。分离好的单个核细胞中加入2 ml PBS液，混匀，制成悬浮液，用细胞计数器计数并求出细胞的密度。
细胞提取液的制备：采用冷冻复融法和超声波溶膜法。将已计数的1 ml在PBS溶液中的细胞悬浮液放到20 ℃冷冻，在37 ℃融化后，置于冰浴中在超声波中溶膜，得到细胞提取液。在实验时，直接将细胞提取液用PBS稀释一定倍数后使用。
细胞提取液中MPO的测定采用毛细管电泳电化学检测法，实验中以PBS为电泳缓冲液。将细胞提取液在5.0 kV进样10 s后，在20 kV的电压下运行60 s。再在毛细管中与底物氢醌（H2Q）和过氧化氢（H2O2）柱上孵育10 min，H2Q和H2O2与MPO发生催化反应，反应方程式示于式［1］。生成的苯醌（BQ）又随着压力向检测端移动，到达检测器时，用碳纤维盘束电极检测。在电极上的反应示于式［2］。
H2Q+H2O2MPOBQ+2H2O（1）
BQ+2H++2e-H2Q（2）
由于过氧化物酶催化底物的反应为专一反应，电化学检测到的是BQ，所以电泳峰便对应于细胞提取液中的MPO活性。细胞提取液中MPO的活性是根据已知的辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP)的标准曲线定量的。不同浓度的标准HRP溶液在相同检测条件下进行毛细管电泳电化学检测，可以得到HRP的标准曲线。由于MPO和HRP都是过氧化物酶，在催化过氧化物的性能以及活性的表征和测量方面是相同的。而酶的活性大小，是用酶的活性单位（u）来度量。即使酶的来源不同，其活性测定方法是相同的，因为它们都是转化相同的过氧化物（底物）。所以可以用标准HRP的活性定量MPO的活性。
根据多次测定细胞提取液的结果计算得到细胞提取液中MPO的平均活性浓度（u/ml），再根据细胞悬浮液中细胞浓度（cell/ml），可以计算出每个细胞中MPO的平均含量（u）。
1.4 统计学处理 用SPSS12.0统计软件将所有检测数据及病例相关资料建立数据库，对照组与ANLL组间的比较采用两样本均数的t检验；ANLL各亚型间的比较采用方差分析F检验，(P
2 结果
MPO在ANLL中的表达结果及其与ANLL各亚型之间的关系见表1、表2和表3。
将M1- M5型MPO平均值进行方差分析结果示：M3病例的MPO平均值最高，与其他4组比较差异有统计学意义（P0.05），但与其他3组比较差异有统计学意义（P
7例M2为M2a 5例，M2b2例；6例M4 为M4a 4例，M4b2例；8例M5为M5a 3例，M5b5例。因各亚型病例数限制，未对其两两之间的比较进行统计学分析，但检测其细胞中MPO值的结果（如表3），符合M2b>M2a、M4a>M4b和M5b>M5a趋势。
关键词：毛细管电泳激光诱导荧光 （CELIF）； 量子点； 转铁蛋白； 偶联； 细胞标记
1引言
转铁蛋白（Trf）是脊椎动物体中一种非血红素结合铁的馇虻鞍祝捎胂赴ど系rf受体结合，内吞化形成内吞小体。在特定信号介导下，Trf可以通过释放铁离子，转移出细胞膜外。由于恶性肿瘤细胞过度表达Trf受体，因此，通过标记Trf可进行肿瘤细胞的识别、诊断和治疗研究[1，2]。量子点作为一种新型荧光材料，近年来在生物成像研究中快速发展，特别是在细胞可视化研究方面[3～11]。量子点用于细胞标记一般需将量子点与靶蛋白偶联，再通过靶蛋白结合在细胞膜或进入胞内显示量子点的荧光，由此进行靶蛋白在细胞膜及胞内的定位及成像分析。因此靶蛋白与量子点的偶联体系的构建是量子点生物成像应用的基础。
本研究选取Trf为靶蛋白，通过其与细胞膜上的Trf受体结合，进而转运靶蛋白量子点的偶联物。目前，量子点与蛋白质的偶联多采用生物素亲和素法、共价法及静电吸附法等。蛋白质与量子点偶联时，二者的混合比例决定偶联产物的质量以及生物功能化的效果。在量子点与蛋白质的偶联反应中建立高效、快速、低成本方法进行表征，对于偶联体系的优化，提高偶联效率非常必要。本研究利用毛细管电泳激光诱导荧光法（CELIF）的高效、快速、高灵敏和样品用量少等优势，对Trf与量子点CdTe偶联的方法和条件进行快速优化，并将得到的CdTeTrf偶联物不经分离而直接用于Hela细胞标记。通过激光共聚焦显微镜进行标记效果的成像观察。实验结果表明， CdTeTrf偶联物具有Trf的生物功能，并能特异性识别细胞膜表面的Trf受体，在其介导下可转运到Hela细胞内，分布在胞质中。CELIF法也适用于其它荧光纳米材料的表面功能化效率表征，包括偶联剂种类的选择和反应比例的优化、偶联产物的性质表征等，具有一定的通用性。
3结果与讨论
采用CELIF进行偶联条件优化可得到偶联产物的定性与定量信息，如荷电性质、荷质比、荧光强度、稳定性等，有助于最佳条件的判断和选择。
3.1偶联剂活化后量子点的表征
因所用量子点是以巯基乙酸为稳定剂在水相中合成而得，故量子点表面包覆着一层羧基，而量子点与Trf的偶联则通过量子点表面的羧基与蛋白质表面的氨基间的酰胺反应完成。NHS和EDC为常用的亚胺偶联剂，实验中对比了以NHS及NHS和EDC混合偶联剂（EDCNHS）活化的量子点性能（图1）。
由图1a可见，以单一偶联剂NHS活化的量子点其荧光强度高且峰形尖锐，说明单一偶联剂NHS活化的量子点粒径均一，有利于减少量子点表面缺陷，增强量子点荧光效率。当使用混合偶联剂活化时，量子点的峰形较宽，峰强度较低（图1b），说明混合偶联剂可能导致量子点的稳定性降低，量子点间产生一定程度的团聚。导致其峰高降低，峰展宽。对比图1a和图1b可见，单一偶联剂NHS活化后量子点性能好于混合偶联剂EDCNHS活化的量子点。因此后续实验均采用NHS偶联剂对量子点进行活化[12，14]。
3.2量子点偶联Trf的条件优化
NHS的存在使Trf可有效的偶联于CdTe表面，形成类似核壳结构的CdTeTrf偶联产物。由图2A第一个电泳图可见，产物峰（3.3 min）相对于活化后的CdTe（图1a， 6.3 min）迁移时间缩短，即量子点偶联蛋白后迁移加快，说明Trf确实已偶联于CdTe表面，且偶联产物表面电荷性质以及整体的荷质比更接近于蛋白质的迁移时间（约3.0 min）。因此说明不同Trf浓度下形成的偶联产物均以CdTe为核，以Trf为壳，呈现为核壳复合物。
随偶联蛋白Trf浓度的增加，偶联产物的荧光强度变化如图2B。当Trf的浓度低于31.2 olL时，随Trf的浓度增加，偶联产物荧光强度明显增强。说明包覆于表面的Trf对CdTe表面的晶格缺陷有所改善。Trf的包覆量越多，CdTe表面越完善，荧光强度越高。但当Trf浓度高于31.2 olL，荧光强度转而开始下降。说明偶联反应在31.2 olL时已达饱和，CdTe表面完全被Trf包覆，而溶液中过量的游离Trf不仅对功能化的量子点有一定的荧光猝灭作用，而且在后续偶联体系标记细胞时，游离的Trf将与偶联产物CdTeTrf一起竞争细胞上的Trf受体靶标，严重干扰CdTeTrf对细胞表面Trf受体的标记。因此，采用CELIF法对量子点偶联条件进行优化，简单快速，可明确判断蛋白质是否偶联于量子点表面，更有利于严格控制Trf与CdTe的反应比例，提高偶联效率和细胞标记效果，后续标记时不需要对偶联体系的产物进行分离纯化。由于Trf浓度增高，会使溶液粘度增加，导致电泳峰展宽，因此采用峰面积考察荧光强度变化。
由图5A可见，当Trf 浓度较低时，偶联产物CdTeTrf对细胞的标记效率低。这是由于低浓度时，偶联所得的量子点自身荧光强度较弱（图2A，低浓度），标记效果欠佳。此外，因量子点表面的Trf较少，与Hela细胞上Trf受体的结合效率较低，导致标记不完全。但当Trf浓度过量时，CdTeTrf量子点标记的效果也较差（图5C），这主要是由于偶联体系中存在的过量Trf会与CdTeTrf表面的Trf共同竞争结合Hela细胞中的Trf受体，此时游离的Trf较CdTeTrf粒径小、位阻小、运动速度快，相比CdTeTrf更易与Trf受体结合，占据了Hela细胞的结合位点，对CdTeTrf与受点的结合不利。对比这两种情况，最优条件下制得的CdTeTrf荧光强度高，且体系中不含游离的Trf，不会与细胞表面受体竞争，标记效果最佳（图5B）。
【摘要】 【目的】 探讨孕中期母血清标志物及脐动脉血流用于预测不良妊娠结局的临床价值。【方法】 采用时间分辨荧光分析技术，对876例孕14 ～ 21周的孕妇进行孕中期甲胎蛋白(AFP)、游离β人绒毛促性腺激素(free-β-hCG)检测;对其中536例孕妇在孕14 ～ 28周使用超声多普勒检测其脐动脉血流，并追踪其妊娠结局。用卡方检验比较孕妇血清标志物升高者(342例)、脐动脉血流异常者(82例)、血清标志物升高且脐动脉异常者(40例)之间不良妊娠结局的发生率的差别。【结果】 与母血清标志物升高有关的不良结局有子痫前期、新生儿窒息、胎儿生长受限、胎儿丢失及胎盘异常。这些相关的不良妊娠结局的发生率在血清标志物升高组为12.65%，在脐动脉血流异常组为8.5%，在血清学标志物与脐动脉血流两者同时异常组为30.95%，与前两组相比有统计学差异。【结论】 孕中期母血清标志物升高合并脐动脉血流异常者，发生不良妊娠结局的风险升高。
【关键词】 孕中期; 甲胎蛋白; 游离β人绒毛膜促性腺激素; 脐动脉血流; 多普勒; 不良妊娠结局
Abstract： 【Objective】 To investigate the clinical value of second trimester maternal serum screening and umbilical artery Doppler for prediction of adverse pregnancy outcome. 【Method】 A total of 876 women were taken blood sample during 14 to 21 weeks for the measurement of alpha fetoprotein and free β human chorionic gonadotropin with time-resolved fluorescence assay. Among them， 536 cases were measured the umbilical artery index with color ultrasound Doppler during 14 to 28 weeks. In the end， the pregnancy outcome was record and analyzed. We compared the difference of incidence of adverse outcome between the group of high levels of maternal serum markers (342 cases)， the group of abnormal umbilical artery index (82 cases)， and the group of both maternal serum markers and umbilical artery index were abnormal (40 cases). 【Result】 The high levels of maternal serum markers was significantly associated with preeclampsia， neonatal asphyxia， fetal growth restriction， fetal demise， and abnormal placenta. The incidence of associated adverse outcome was 12.65% in the group of high levels of maternal serum markers， 8.5% in the group of abnormal umbilical artery index， and 30.95% in the group that both maternal serum markers and umbilical artery index were abnormal. The adverse outcome incidence of the last group was significant higher than the former two. 【Conclusion】 High levels of maternal serum markers combine with abnormal umbilical index are associated with higher adverse outcome incidence.
唐氏综合征(Down?蒺s Syndrome，DS)是活产新生儿最常见的染色体疾病，其血清学产前筛查正在普及。目前我国大部分地区采用孕中期母体血清标志物甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)、游离β人绒毛促性腺激素(free β human chorionic gonadotropin，free-β-hCG，以下简称hCG)二联生化指标筛查，以评估胎儿可能患唐氏综合征、18-三体综合征、神经管缺陷等疾病的风险率。近年来国内外研究表明，当不存在染色体异常及胎儿畸形时，母体血清标志物水平的异常升高与不良妊娠结局有着密切的关系[1-3]，于是孕早、中期母血清标志物对于不良妊娠结局的预测意义逐渐成为研究的热点。但由于仅仅使用血清标志物进行不良妊娠结局的预测存在特异度、阳性预测值不高的缺陷，对临床的指导意义有限。现阶段研究的重点逐渐转移至开发新的标志物，即与血清标志物联合使用时，能提高预测的效果，提高临床应用的价值。脐动脉血流与胎儿、胎盘血液循环密切相关，它反应了胎儿血液灌注情况。国内外大量文献报道脐动脉血流频谱异常的围产儿其胎儿窘迫发生率、新生儿窒息率、胎儿宫内发育迟缓率及围产儿死亡率均明显高于血流正常者[4-6]。母亲方面如子痫前期[7]、糖尿病等导致胎盘缺血、缺氧的疾病可以导致脐动脉血流频谱比值增高[8]。因此，通过对脐血流图分析，从而了解胎儿、胎盘循环阻力情况，对高危妊娠的监测及胎儿结局预后有重要的临床价值。脐动脉血流是否能作为与血清标志物联合用于评估母儿结局的指标，尚待进一步研究。而目前将血清标志物联合脐动脉血流用于监测胎儿结局的研究尚处于空白阶段。本文旨在探讨孕中期血清标志物(AFP、hCG)及脐动脉血流与不良妊娠结局的关系，评价二者联合用于预测不良妊娠结局的可能性及意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象
2006 年1月至2009年4月期间在中山大学附属第三医院进行如下检查的孕妇：妊娠14 ～ 21周血清学筛查(共876例);其中在妊娠14 ～ 28周彩超下行脐动脉血流监测(共536例)，并有分娩结局者。纳入标准：分娩的胎儿无染色体或结构异常者;单胎妊娠;汉族;排除行产前筛查时已患有本次研究中的产科并发症或病理妊娠的孕妇;排除IVF的孕妇;排除与AFP升高有关的疾病，如部分卵巢肿瘤、肝癌等。
1.2 诊断标准
主要观察的妊娠结局(及妊娠并发症)包括：子痫前期;胎儿生长受限;低出生体重儿;新生儿窒息;胎儿丢失;胎盘异常：包括前置胎盘、胎盘早剥、胎盘植入;早产;羊水过少;产后出血;妊娠合并贫血;妊娠期糖尿病;胎膜早破;脐带绕颈;内科合并症：包括肝功能异常、自身免疫疾病、妊娠合并性传播疾病等。以上妊娠结局(及妊娠并发症)的诊断参照乐杰主编的《妇产科学》第6版的标准。
1.3 方法及试剂
1.3.1 试剂及仪器
接受筛查者在孕14 ～ 21周期间，抽取静脉血2 mL。待自然凝固后分离血清，标本保存于-20 ℃冰箱，于1周内收集并由专人检测。筛查的血清标志物为AFP和Free-β-hCG。血清学分析测定使用广州市丰华生物工程有限公司生产的AFP和Free-β-hCG试剂盒，检测仪器采用泰莱Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析系统，测定按操作程序严格进行质控，测定批内变异系数，不同批次试剂不混用，异常结果重复实验2次。运用风险评估软件计算上述两种标志物的中位数倍数(MoM)值，凡AFP≥2.0 MoM和/或hCG≥2.0 MoM的孕妇为血清学标志物升高者。采用珠海艾博罗生物技术有限公司提供的产前筛查软件系统。
应用PHILIPS公司彩色多普勒超声诊断仪常规检查胎儿，探头频率3.5 mHz。选择脐动脉近胎盘处进行多普勒检测，取样容积2.4 ～ 3.6 mm，角度 < 60°，连续出现3个以上相同波形时，测量S/D、RI、PI数值并记录(图1、2)。脐动脉血流的S/D、RI、PI正常值范围参照参考文献[9]。
1.3.2 研究方法
筛选不良妊娠结局：血清学标志物升高者包括单项血清hCG≥2.0 MoM、单项血清AFP≥2.0 MoM及两项血清标志物水平均升高，分析它们与血清学标志物正常者(hCG及AFP均 < 2.0 MoM)的上述妊娠结局(妊娠并发症)的发生率的差异，差异具有统计学意义的妊娠结局为与血清标志物升高有关的不良妊娠结局。比较血清标志物升高者、脐动脉血流异常者及两者同时异常者之间相关不良妊娠结局发生率的差异。
1.4 统计学方法
所有数据均输入EXCEL表格，采用SPSS 17.0软件包进行统计学分析。各组数据所得结果中，计量资料用x ± s表示，计数资料用百分率(%)表示。计量资料采用t检验，计数资料采用四格表?字2检验、连续校正?字2检验及Fisher?蒺s精确概率法进行统计。P < 0.05时认为有统计学意义。
2 结 果
2.1 研究人群的一般状况分析
总例数876例，其中血清学标志物升高者(以下简称升高组) 382例，血清学标志物正常者(以下简称正常组) 494例。升高组平均年龄(29.56 ± 3.72)岁，正常组(29.53 ± 3.50)岁，两者比较P = 0.880 > 0.05，无统计学差异;升高组平均体重(54.39 ± 9.22) kg，正常组(54.73 ± 6.97) kg，两者比较P = 0.537 > 0.05，无统计学差异;升高组平均筛查孕周(17.82 ± 1.83)岁，正常组(17.90 ± 1.85)岁，两者比较P = 0.502 > 0.05，无统计学差异。升高组中hCG≥2.0 MoM者285例，AFP≥2.0 MoM者76例，hCG及AFP均≥2.0 MoM者21例。
2.2 相关不良妊娠结局的筛选
比较血清标志物水平升高者(382例)与正常者(494例)之间不良妊娠结局的发生率。将血清标志物水平升高者中进行分组，分为hCG≥2.0 MoM，hCG≥3.0 MoM，AFP≥2.0 MoM，hCG和AFP同时≥2.0 MoM 4个组。比较4个组与血清标志物正常者之间各种不良妊娠结局及并发症的发生率。当hCG≥2.0 MoM时，子痫前期、新生儿窒息的发生率与正常者之间的差异有统计学意义;当hCG≥3.0 MoM时，胎儿生长受限及子痫前期的发生率与正常者之间的差异有统计学意义;当AFP≥2.0 MoM时，子痫前期的发生率与正常者之间的差异有统计学意义;当hCG和AFP同时≥2.0 MoM时，胎儿丢失、胎盘异常的发生率与正常者之间的差异有统计学意义。而其他9种不良妊娠结局或妊娠并发症的发生率在血清标志物升高者与正常者之间无明显差别。因此，与血清标志物升高有关的不良妊娠结局应包括子痫前期、新生儿窒息、胎儿生长受限、胎儿丢失及胎盘异常。
2.3 血清学标志物水平与不良妊娠结局的关系
比较血清学标志物水平升高组与正常组之间的上述筛选出的不良妊娠结局(即子痫前期、新生儿窒息、胎儿生长受限、胎儿丢失及胎盘异常)发生率的差异。血清学标志物水平升高者，即AFP≥2.0 MoM和/或hCG≥2.0 MoM者，共382例，其中发生相关不良妊娠结局者有56例，发生率14.67%;同期检测的血清学标志物水平正常者，即AFP和hCG均 < 2.0 MoM，共494例，其中发生相关不良妊娠结局者有25例，发生率5.06%。两组发生率之间具有统计学差异，P值为0.000，OR值3.223，95%置信区间(1.970-5.272)。
2.4 脐动脉血流异常与不良妊娠结局的关系
在876例孕妇中，共进行536例脐动脉血流监测。脐动脉血流异常组，即PI、RI、S/D三项中一项或几项异常者，共123例，其中发生上述相关不良妊娠结局者有20例，发生率16.26%;脐动脉血流正常组，即PI、RI、S/D三项均正常者，共413例，其中发生上述相关不良妊娠结局者有18例，发生率4.36%。两组之间不良妊娠结局发生率具有统计学差异，P值为0.000，OR值4.261，95%置信区间(2.175 ～ 8.350)。
2.5 两指标单项与二者同时异常与不良妊娠结局的关系
进一步比较血清学标志物或脐动脉血流单项异常，与两者同时异常之间不良妊娠结局的发生率，分别为43/340(12.65%)、7/82(8.5%)和13/42(30.95%)，可以发现，单纯血清学标志物升高或单纯脐动脉血流异常与两者同时异常者3组之间不良妊娠结局发生率有统计学差异，P值为0.007。两两比较，单纯血清学标志物升高与单纯脐动脉血流异常的不良妊娠结局发生率的差异没有统计学意义，P值为0.301;而血清学标志物升高组、脐动脉血流异常组与两者同时异常组不良妊娠结局的发生率的差别具有统计学意义，P值为0.002、0.001。
3 讨 论
近年来，一些学者观察到hCG水平显著增高的孕妇发生不良妊娠结局的几率明显高于hCG水平正常的孕妇。Ong等[10]测定5584例妊娠10 ～ 14周的母血hCG，然后随访妊娠结局，认为异常hCG水平与不良妊娠结局的发展有关。hCG水平的变化作为监测妊娠中母儿危险性的指标，其可能的病理生理基础为某些病理因素导致胎盘滋养细胞低氧环境，从而使滋养细胞大量地反应性增生，hCG产生增加，并分泌入血，使母血清中hCG水平升高。
血清AFP值可预测胎血甲胎蛋白值以及胎-母屏障的完整性和通透性。Alkazaleh等学者[11]对孕中期AFP的升高对不良妊娠结局的预测(包括FGR、早产、子痫前期、胎盘早剥)进行研究，认为可能是胎盘缺血-血栓形成而导致胎盘屏障的破坏，使得AFP由胎儿向母体循环输送增多的结果。而胎盘缺血-血栓形成可导致胎盘功能不全。Gkogkos 等[12]所做的前瞻性研究表明，中孕期母血AFP≥2.0 MoM时，联合其他胎盘功能检测项目，可有效检出严重胎盘功能不全及相关不良妊娠结局。
当脐动脉血流出现异常，反映了胎儿、胎盘循环量不足[13]。刘智等[14]研究表明，当胎盘小叶被结扎60%时，脐动静脉血流均有改变，因此，脐动脉血流反映了胎盘小叶的循环情况，如出现胎盘病理状态，如胎盘水肿、缺血、梗死等，达到一定的严重程度时，脐动脉血流将会出现异常改变。
本研究发现，子痫前期、胎儿生长受限、胎儿丢失、新生儿窒息及胎盘异常的发生率在血清标志物升高组与正常组之间的发生率是存在统计学差异的，而上述不良妊娠结局与胎盘功能不全有密切关系，因此，其病理生理基础可能为胎盘功能不全引起母血中血清标志物水平升高，而胎盘功能不全最终导致了上述不良妊娠结局。
将血清标志物升高用于预测不良妊娠结局，当两个标志物同时升高时，其预测不良妊娠结局的OR值最高(51.895)，相关的不良妊娠结局为胎儿丢失。而单个标志物升高预测不良妊娠结局的OR值则较低。因此，当有两个标志物同时升高时，我们首先应关注胎儿丢失的风险，其次为胎盘异常。
我们发现在比较不良妊娠结局的发生率时，使用单一指标血清标志物水平升高及脐动脉血流异常与两者联合相比，差异具有统计学意义，而将三者进行两两比较，两个单一指标与联合指标相比，差异均有统计学意义。说明在3种指标中，联合指标与不良妊娠结局的关系较两种单一指标更为密切。因此，将血清标志物与脐动脉血流联合用于预测上述不良妊娠结局，其效果应优于两种指标单独应用。至于其具体筛查效果如敏感度、特异度等，仍需进一步评估。
在临床工作中，如中孕期唐氏综合征筛查中血清标志物升高(≥2 MoM)，在排除了染色体及胎儿结构异常后，应密切关注孕14至28周的孕中期脐动脉血流检测，如有一项或多项指标异常时，与子痫前期、胎儿生长受限、新生儿窒息、胎盘异常或胎儿丢失的不良妊娠结局关系密切，应视为高危妊娠处理，告知患者相关风险，适当增加产前检查次数，注意与胎盘功能有关的检查如彩色多普勒超声观察胎盘形态、复查脐动脉血流等。
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对于日用洗涤剂这种同质化非常严重的产品，企业间的竞争很大程度上体现在企业的营销能力和策略水平。白猫是怎么打好自己的营销牌，在洗洁精市场独占鳌头的呢？
“前有狼后有虎”
至今已有50年历史的上海白猫，在计划经济年代是中国洗化行业的一艘旗舰。白猫眼看着身边的诸多日化业同行，纷纷倒在宝洁、联合利华、花王、德国汉高等世界日化业巨头凌厉的市场广告攻势之下，式微于新近崛起的雕牌、奇强、立白等日化新锐强大的市场宣传促销之中。目前，上海白猫有限公司在承担着2000多名退休工人退休金的同时，还要负担着其作为国有企业所应负担的其他各项费用。
自上世纪90年代以来，国内日化企业与跨国日化巨头的竞争硝烟就遍布中国。无论是从规模上还是程度上看，中国民族日化工业正在遭受史无前例的冲击。
跨国日化巨头最重要的手段之一便是高密度的广告宣传和巨额的市场投入。高强度、高密集、高质量的广告投入是其进入市场的首选策略。仅宝洁公司在中国一年的广告投入就近10个亿，这几乎相当于几个中小厂家一年的销售额。
自上世纪90年代前期始，民营日化企业开始崛起。首先是浙江纳爱斯公司的“雕牌”和山西南风集团的“奇强”发难，由奇强洗衣粉挑头，雕牌洗衣皂紧随其后，发起了一场从农村包围城市的洗化市场争夺战，以当时市场上最低的价格，以最优惠的促销政策，从最边远的乡村集镇零售终端铺货开始，从下游狙击白猫、汉高、活力28等洗涤产品市场。他们的产品质优而价廉，基本上占领了中低档洗涤剂市场。
在这种情况下，对上海白猫而言，只能用“前有狼后有虎”来形容。如何在市场推广费用极其有限的情况下，进一步研究市场特点，摸清消费者的消费习惯，更有效地拓展市场，成了摆在白猫高层经营管理者面前的首要问题。公司总经理马立行带着经营决策层的全体人员，从中国最南边的海南岛，到最北边的东北三省，实地调查中国日化市场的通路、终端运转状况以及竞争对手的实际措施和经营手段。
在回上海不到一周的时间内，白猫在汇集公司主要经营团队的研究结论后，提出要靠三个字去开拓市场——“抢、拼、搏”：抢就是抢市场、份额和时间；拼就是拼实力，表现在资本、网络、人力等方面；搏就是搏智力，“靠脑子做市场”，体现在竞争战略、市场策略上。
搭建深度分销机构——经营分公司
于是围绕着“抢、拼、搏”的经营方针和理念，白猫推出了当时在中国日化业具有开创意义的省级分公司模式。
针对上海白猫产品的高、中、低档较为全面的情况，从中间向两头扩展是其最佳的市场策略。而搭建旨在进行深度分销的经营机构——各省级分公司，可以一方面充分地向农村乡镇市场渗透，进行深度分销，以弥补白猫传统上较为薄弱的市场环节；另一方面利用各省级分公司所在地的优势，在省辖的主要城市里充分做好自己的品牌。这样可以最大限度地避免当时几乎置许多民营、国有日化企业于死地的严重问题——坏呆帐，还能够控制住扰乱日化企业正常盈利能力的经销商窜货现象。白猫的这一重大决策可谓一举四得。
上海白猫(集团)有限公司在两年的时间里，投资约3000万元建立了29家省级销售分公司，遍布全国各地，构成覆盖全国城市、乡镇和农村市场的完善的营销网络。公司直属的营销人员已达到1000余人。如果没有这样迅速建立的销售网络，白猫产量和销售额出现大幅增长是不可想象的。在搭建完成经营分公司后的几年间，上海白猫的销售量几乎每年呈30%以上的速度增长，从设立分公司前销售额约为2亿元，到成立当年就达到3.4亿元，五年后的今天已达到18.7亿元。
白猫认为虽然从短期情况看，用3000万元搭建省级销售分支机构，投入的费用好像是大了点，但是，相对于其他日化厂家存在的经营风险来讲，实在算不上大。事实也是如此，上世纪90年代初曾经叱咤于日化行业的国内某著名品牌，到1994年坏呆帐已达到近1个亿！白猫凭借其分公司策略，得以跳出坏呆帐的死亡陷阱，得以独善其身。而当初同属占有全国洗化市场70%以上的诸多上海日化同行们，却由于坏帐缠身等原因而被迫退出了日化市场。
深度分销继续拓展——经营部
从1998年始，上海白猫又开始着手新一轮的渠道创新，在各地的二、三线城市相继建立紧密结合型的经营部。
白猫在各地的经营部通过科学有效的考核，在实现经营部、经销商、终端商各方应得利益的情况下，进一步夯实经销渠道，加强对各级终端的控制力，杜绝坏帐和窜货现象。目前，白猫的经营部里坏呆帐已为零，并通过具体的考核来防止窜货现象，提高各地县级城市经销商经营白猫品牌的积极性。
原来由经销商经营白猫产品在大连地区的销售，经销商财务帐上应付白猫货款最多时达到五六百万元，而且是长期拖欠，而大连经销商的年销售额却只有二三百万元。在白猫大连经营部建立的当年，其销售量就猛窜至800万元，却没有出现一分钱坏帐。当地的沃尔玛、家乐福等现代终端的产品出样率达到73%以上，而原来花费更多的费用，出样率也不到20%。现在大连经营部已成为白猫北方现代终端的总洽谈商，以期在现代终端商处获得更多的谈判价码。
我是一只猫。这是我生下来后在人类世界经过两个月的苦苦追寻终于得到的结果。这个结果让我喜极而泣。是的，我是一只毛色纯白可爱的猫。我有粉色的小肉垫，尾巴上可爱的绒毛。可是当我为这个认知喜极而泣的时候，我又突然明白，我成了一只无人领养的小野猫！
我伤心地趴在地上，嚎啕大哭。周围的人们却用奇怪的眼神看着我，然后鄙视地说：“这么小就发春了……”我听不懂意思，然后无奈地磨爪子，摸摸自己可爱的小绒毛和小肉垫，然后发誓今天晚上我很伤心，决心只吃一条鱼。我听见过其他野猫叫的声音，还问过一只老猫，她喵呜喵呜地告诉我，野猫半夜猫叫一般都在发春，我眨眨眼睛问她什么是发春。她摇摇头深沉地告诉我，小孩子懂这么多要干么。然后很善良地还教我发出喵呜喵呜拉长的声音，她说这个猫叫声听起来比较妩媚，以后我择偶的时候，提供给我选择的公猫会比较多。我感激地让她摸了摸我的粉红小肉垫。
晚上我真的只吃了一条鱼。从垃圾桶捡来的，味道很恶心。可是那只老猫告诉我，猫都喜欢鱼的。我是猫，当然喜欢鱼，于是我咽了下去。我做了个梦，梦到有一只善良的母猫还有一只猥琐的不明生物。不明生物对母猫不知说了什么，母猫惊叫不要。她满脸是泪，我见尤怜。我同情心泛滥，却不知道怎么安慰母猫。
然后一觉醒来我发现我换了新地方。不是那个舒服的纸皮堆，而是干干净净的毛毯。我一滚，毛毯就变色了。变得黑黑的脏脏的，上面还有我的爪子印。我默哀着毛毯，一边打量自己所在的地方。是屋子，有家具，有吃的。打量完毕。
另一间屋子的门突然开了，嘎吱的声音让我觉得很悦耳。然后我抬头以45°明媚而忧伤的姿势仰望。是一个人类。有头发有眼睛，还有嘴巴鼻子和耳朵。然后是雄性。
雄性人类似乎惊讶于我的苏醒，然后不管不顾地扑上来呼唤我羞羞……我震惊而愤怒，我做为一个雌性猫咪，绝对不能让一个雄性人类破坏了我的和清白！我爪子抓过去，然后愤怒地要撕咬。结果雄性人类却猥琐地摸了摸我引以为傲的粉色小肉垫傻乎乎地笑了。
这件事情过去一年多了，我也不再是年幼无知的小野猫了。我成了这位雄性人类口中的宠物，名字叫做羞羞。据说我是他口中从天而降的莫名其妙的宝贝。他让我唤他主人，我扭捏地给他一爪子。因为他不仅是个猥琐的变态，还好面子，勒令我不准在他房间撒尿。
现在我是一只小家猫，我有名字，我叫羞羞。
二
老大！怎么办啊！袅袅跟着那个人类住在一起了！一只哭泣的水獭以明媚而忧伤45°仰望高高在上，实际比自己矮的一只狐狸。
，我们不会去抢回来啊！王上只规定我们把袅袅带回来，其他的什么都没规定，怕什么。天塌下来，有例如我这样高的狐狸顶着。
水獭的内心泪水在汹涌。明明我一直比你高的……
二人组制订了完美的计划。名字很好很动听，叫做袅袅的浪子回归路。
请原谅这两只动物的用词不当，毕竟这是这两只动物商量一晚上否决一晚上得出的理论。
第一步。袅袅出现了，好白好亮的皮毛啊！狐狸羡慕地望向那只白色的猫，然后变身狐狸犬的他被旁边伪装成老鼠的树獭揪着办正事。老大老大，那个雄性人类要上班了，袅袅现在一个人在家，我们去抢吧！
狐狸淡定了，高傲地对书獭说。你进攻，我帮你四处看着。树獭内心更有泪水奔腾。不带这么欺负树獭的啊。树獭不情不愿地颤抖着走到猫的面前。你好……嗨……
白猫无视了这只奇怪的老鼠，思索着今天好像没有摸自己的小肉垫。
树獭的胆子大了起来，然后慢慢捂住白猫的眼睛，大叫着。狐狸老大快来帮忙啊！
白猫一爪推开这只找死的老鼠，继续思索这个伟大的问题。
引诱袅袅的回归路。宣告毁灭。
第二步。很好，袅袅又出现了。
树獭举着一条自己很舍不得的鱼隆重做了告别仪式，狐狸又气又急，然后在一旁安慰自己他笨他脑子有问题……树獭举着这条鱼，从阳台上悄悄进入白猫所在的屋子。安稳入睡的白猫翻了个身，继续睡。树獭坚持不懈地把鱼高举于白猫的眼前。
白猫翻了个身，还是睡。其实无论怎么翻，她仍然是趴着的。
内心激浪的树獭仰天泪流。狐狸老大，袅袅的浪子回归路，任重道远啊……
第三步。决心自己出手的狐狸相信自己一定能使袅袅重新回到他们身边的。他趁着袅袅在大街上闲逛的时候，拦住了她。然后飞扑着流泪……袅袅，我是狐狸叔叔啊……
白猫羞羞觉得自己今天遇到了两只神经病。狐狸哭诉着自己这几年过得不好，王上虐待，没有袅袅在身边寂寞难耐……羞羞无语地望天。 狐狸终于说出了一句正常严肃的话。羞羞，跟我走，大家都找?煤镁昧恕
茫然的羞羞抖了抖耳朵。狐狸严肃地对着茫然的白猫教育道。你是王上的三姑妈的六阿姨的四妹妹生的女儿，由于王上的三姑妈的六阿姨的四妹妹生你时跑出了生命森林，最后把你生在了人类世界，却和你失散了……袅袅，你妈妈很想你。
白猫羞羞石化了。没想到自己还有个妈妈？！而且自己根本不是人类世界的普通猫？！太惊悚了，比和雄性人类看所谓鬼片还惊悚！ 无法接受现实的白猫羞羞可耻地晕过去了……
三
白猫羞羞知道这次醒来一定在不同的地方。
是洞穴。
一只善良的白猫泪奔着朝自己飞扑而来。不用说，这是梦中的善良白猫，也是狐狸口中的妈妈了。被妈妈紧抱着的羞羞感到一种从未有过的幸福。很满足，比吃了雄性人类给自己的猫饲料还满足。
洞穴外渐渐有个黑点朝着自己走来。羞羞抬起头，却看到一匹纯白的似马非马的物种。善良白猫热情地介绍物种。这是马猫，是王上，至于辈分……怎么也想不出怎么让袅袅称呼马猫的猫妈纠结着。
羞羞看着马猫，眨巴着猫眼善良地问了一句。难道你真是马和猫生出来的？羞涩的马猫不好意思地承认了。
被雷得风中凌乱的羞羞仰天无语。
生命森林的动物很奇特。生命森林的动物很人类化。生命森林的动物很好相处。
善良的猫妈，猥琐的狐狸和树獭，以及奇怪物种马猫。从这一天起，羞羞正式改名为袅袅。
袅袅却时常很忧伤，她想起雄性人类的家，想起那群人类世界的野猫，想起雄性人类的温柔，想起他的忍让。袅袅叹了口气。难道自己还不知足么？
善解人意的猫妈让袅袅最后一次回去人类世界。袅袅回到了她和雄性人类住的屋子。很干净，地上还残留着她的猫毛。可是这个时候，雄性人类不是下班了么？她看到桌上有一叠纸，写着鸟语，不懂。却看到有照片，照片上骄傲的白猫不屑地望着镜头。
袅袅的眼角有透明液体。她自我安慰：猫是不轻易流泪的。
雄性人类回到了家，他看到袅袅激动地扑上出，泪如泉涌。羞羞，羞羞……我以为你走了……再也不回来了……
不喜欢矫情的羞羞一爪子拍开他，眼角却有透明的液体。
袅袅回到了这件屋子。回到了人类世界。
她还是羞羞，不是袅袅。
生命森林的动物们制定了很多的袅袅的浪子回归路计划。连猫妈都出动了。
羞羞不为所动依然淡定地在人类世界当一条普通的白猫。
她想清楚了，自己没有太复杂的思维。母爱，没有人类的生命森林。这些尽管很美好，可是还有雄性人类。他是她的主人，是他将自己带回家。然后让她明白，这是她的家，是她可以依靠的地方，而他像她的亲人一样。
而就在三天前，上海白猫股份因2007年、2008年连续两年亏损，被上海证券交易所开始实施“退市风险警示”特别处理。股票报价的日涨跌幅也被限制在5%。同时这也使上海白猫股份，成为今年第一家披星戴帽的上市公司。
对此，荷宝基金首席分析师陆敏在接受《中国联合商报》记者采访时分析：“这意味着上海白猫股份，已经站在了生与死的十字路口。他们目前只有或者重组成功或者暂停上市甚至退市两种选择。”
难解的亏损困惑
根据上海白猫股份年报披露的数据，上海白猫股份2008年实现主营业务收入34895.31万元，同比略升1.18％；受外部环境影响，实现主营业务利润2709.51万元，同比下降28.31%。扣除销售费用近5000万元、管理费用3400多万元、财务费用300多万元等，白猫的净利润为-3500多万元，每股收益为-0.234元。
“大家都在把亏损归咎于去年爆发的金融危机，可我们在国际贸易上是赢利的，不知问题到底出在哪了。”上海白猫股份国际贸易部一负责人，在接受《中国联合商报》记者采访时说道。
对此，上海白猫股份董事长办公室一负责人陆梅向《中国联合商报》记者进行了解释：“我们在去年的外贸销售收入同比上升了24.78％，但受人民币汇率上升的影响，销售利润却同比减少1224.21万元；再加上前年下半年国家开始调整牙膏出口退税率，也使我们外贸销售利润同比减少539.97万元。”
“这些都是大家共同面临的外部大环境，白猫股份之所以连年出现亏损。我认为最重要的是在国内牙膏产品销售异常激烈的情况下，白猫股份由于重组不畅导致投入不足，以致影响了它的市场营销和拓展进度。”中投证券上海营业部投资经理戴克江向《中国联合商报》记者如此表示。
一波三折的重组
对于上海白猫股份的处境。业内人士分析，必须依靠大股东的力量才能走出来。但在事关重组的大问题上，上海白猫股份的大股东浙江新洲集团的表现让人很是摸不透。“我们的管理层也一直在积极配合、督促大股东推进资产重组工作，可自从去年4月28日出台了一个重组方案后就一直进展不顺。现在更是没有任何动静和进展。”陆梅带点抱怨的口气向《中国联合商报》记者说。
根据陆梅的说法，在2008年4月28日和5月9日，他们曾联合第一大股东新洲集团对上海白猫股份做了一个重大资产重组的公告。公告的大体内容是新洲集团将下属房地产公司股权与白猫股份的全部资产、负债进行置换，置换完成后，白猫股份转型为房地产开发企业。
而在《中国联合商报》记者致电新洲集团总裁办公室询问时。一个姓王的负责人也表示：“现在还没有任何关于重组这方面的新消息。具体的部署也还没听说。”不过谈起这个重组方案姓王的负责人承认有这个事。“为了此次资产置换，我们还在上海普陀区全资设立了上海威顺投资管理有限公司，用于购买新洲集团拥有上海白猫股份的股权，再将白猫股份全部资产和负债划进来。”
新洲集团在当时也承诺，“在注入两家地产公司进入白猫股份后，新洲集团将不再从事新的房地产业务以解决同业竞争的问题。”
没有选择的选择
那么面对连年亏损和重组的缓慢，上海白猫股份到底是选择重组成功还是暂停上市甚至退市，恐怕已经没有多少时间来进行思考了。
“上海白猫股份是国企，在日用领域尤其是牙膏方面是中国的一面旗帜。因此是不可能轻易退市的。剩下的就只有一条路可选了那就是重组。”陆敏向《中国联合商报》记者解释。
事实上，这几年上海白猫股份也一直为避免退市而挣扎着。如在2005年白猫股份在净利润为-701万元的情况下，才引入了新洲集团。
对此说法，王立欣表示认同。“当然如果能够扭亏为盈更好了。但截止上海白猫股份到今天的表现，这种可能性的发生有很大的难度。”
相关资料也显示，此前的2007年，白猫股份亏损了925.2万元。而今年则是3500万元。显然，白猫股份的经营情况非但没有好转，而且呈现出加速滑向泥潭的趋势。然而，白猫股份的资产置换方案至今尚无明显的进展。
“我认为不排除改变把上海白猫股份变为房地产公司的重组计划，毕竟作为上海白猫的第一大股东，新洲集团此前一直没有过经营日化行业的背景，而且从新洲集团进入上海白猫股份的作为看，也并没止住上海白猫股份继续下滑的势头。”戴克江向《中国联合商报》记者分析。
众多行业分析师认为，各项成本、费用增加是上海白猫股份业绩亏损的重要原因,并且由于目前国内价格战的激烈，白猫亏损的局面并不会在短期内改变。
在一条叫做“黄色街”的街上有一幢房子非常老，那里所有的住户搬走已经有一年了。这幢房子现在是空空洞洞，一点声音也没有。它看上去像是被封闭了，再也不会有人要搬进去住了。但有些孩子却跑到那里去瞧了一下。
“怎样拆掉它呢？”罗茜妮问。
“第一步从屋顶开始。把那些瓦堆在院子里，留待以后再用——那时人们将会再建一座新房子。”维克多解释着说。
“我们进去瞧瞧，看里面有些什么东西！”波布说。他们于是便都涌进屋里去，涌进楼梯间去，他们跑进一些房间里，大声叫喊。他们所能听到的只是那些空洞的房间所发出的回音。在厨房里，罗茜妮发现了一只白猫。它在眨着眼睛，伸着懒腰。
“只有你住在这里吗？”大家问它。
“喵。”它回答说。
“那么你就算是我们的猫了！”罗茜妮说。
这只猫儿又喵喵地叫了几声。
但是在市政厅里，人们给工人下达了这样一个指示：
“到黄色街去把那里的三号老房子拆除掉。”
工人们坐着卡车出发了。他们穿过了五个十字路口，然后他们就向左拐。黄色街上来往的汽车不多。钻进那幢老房子的孩子们都跑到窗口边来。卡车在三号门口停下了。工人们抬起头来向这房子瞧了瞧，不知道怎么办才好。他们喊：
“这不是要拆除的那幢房子！它里面住满了孩子呀！”
他们于是便离开了。他们在城里各处去找另一条黄色街和另一座三号房子。但他们什么也没有找到。
在厨房里，孩子们围着那只猫儿坐下来。他们要做一些计划：在回到自己家里去吃早饭以前，他们都答应午后一定要在这三号集合。这座老房子现在已经是属于他们的了。他们将要在这里过有趣的生活！
瞧他们是怎样安排这幢房子的——他们从自己父母家的地窖和储藏室里带来了一些旧木匣子，然后把匣子又改装成为桌子、椅子和小柜。每人都有一个小柜子，里面摆设着他们自己心爱的一些东西：金纸和银纸啦、玻璃球啦、从杂志上剪下来的一些彩色画啦、一些有趣的书啦、小镜子啦、颜料管啦、一把锤子啦、弹弓啦，等等。
孩子们用彩色纸剪出一些擦嘴用的餐巾。他们还用罐头瓶子做出一些漂亮的花瓶。他们还从家里搬来一些花钵子，现在也摆在窗台上。这座房子现在又变得年轻了。
但是市政厅又把工人们喊去，向他们传达了关于这个城市的计划，说：“就在今天，黄色街上的那座三号房得拆除掉！”
工人们在那个三号房面前经过了好几次。每次他们都停下来，对自己说：
“但这并不是一个老房子呀。它里面住着人。每个窗台上还放着花！”
他们又离去了。这整天他们寻找那另一条黄色街和那另一座三号房子，但是毫无结果。
孩子们也把院子布置了一下。他们在这里种了欧芹菜、胡萝卜、萝卜和草莓。他们还给这个院子修了一个篱笆。接着他们又在大门上公布了一个住户名单。
他们的父母现在发现，要劝说他们的孩子每晚回到家里，回到自己床上去睡觉，倒成了一件相当困难的事了。那只白猫已经对他们宣誓，要效忠于这些孩子。它每天夜里迈开它那天鹅绒般柔软的步子，在这幢房子的周围巡逻。它不让其他人进屋。
有一天气温变得冷起来了。罗茜妮在炉子里生起火，给大家煮可可茶吃。十个孩子围着一张大桌子坐下来。这儿确实很舒服，很温暖。
载着工人的卡车又在这座房子面前停下了。孩子们跑到窗口那儿，喊：“叔叔们好！叔叔们好！”
工人也回答说：“你们好！”接着波布也走下楼来了。他和他们交涉，他们是否可以运点白沙子来，把院子里的那些小径铺上沙子。
“当然可以，我们将搬运一些来。”工人们表示同意。他们接着就离开了，说：“这是我们第三次被派来拆除黄色街三号的房子！不过这并不是一座老房子呀。每次它显得更年轻。它的烟囱甚至还在冒烟。这里住满了孩子，院子也料理得很好，而且门槛上还坐着一只漂亮的白猫。”
去的那天，凉风习习，非常的冷。可我还是很早的就到了电影院，我兴奋不已。在话剧开始前，我大声地唱歌、背古诗、读课文，可热闹啦……
话剧开始了，出现了独眼狼、单眼狼，他们被关进大牢里，外面有很多士兵守卫。就在这个时候，臭狐狸代表大灰狼来看他们。它手里拿着一盒曲奇饼干，说：“我特意代表大灰狼来看你们了，这盒饼干是我们的一点心意。当年大灰狼和你们一起坐牢，可是被一场海啸分开了，这次我们找到了你们，特意送来饼干，表示一点心意……”
狐狸走了，卫兵也走了。独眼狼和单眼狼食偷偷地把曲奇饼干盒打开，他们发现盒子里面有一个纸条和一把万能钥匙，他们说：“这一定是大狼给我们的。”然后他们说，这两天一定会来一场大大的雷阵雨，所以要它们趁雷阵雨和雾气很大时把门偷偷打开，逃出去。
当然，这个计划成功了。半路上，突然听到黑猫警长的声音，他们拼命的逃，逃到了一家超市店门口，因为今天有雷雨，超市提前关门。他们突然想起自己手中有一把万能钥匙，他们就用万能钥匙把门打开，进入超市偷走了很多东西，把肚子也填饱饱的了。
可当出来的时候，发现黑猫警长把他们包围了。这时，大狼和狐狸从四周杀来救他们，于时他们冲出了包围。坏蛋们一起逃啊逃啊，突然发现黑猫警长在前面拦住了他们，白猫警长和小鹿警官在后面拦住了他们，使他们无路可逃，又被关进了大牢。
一会儿，狐狸、大狼、单眼狼、独眼狼趁他们休息又逃出了大牢。哈哈，他们逃出去时候被黑猫警长发现了，最后他们被打的落花流水……再一次被关进大牢。
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